葡萄（霞多麗）漿果中糖苷酶分布的研究.pdf

1、β-葡萄糖苷酶是分解和釋放葡萄汁和葡萄酒中無香氣的香氣前體物的關鍵酶類。本文探索優(yōu)化了霞多麗漿果中β-葡萄糖苷酶的粗酶液制備方法，還建立了以 p-NPG為底物的比色法測定霞多麗漿果中的β-葡萄糖苷酶酶活性檢測方法，并且檢測了霞多麗葡萄果皮、果肉、果梗和種子中的β-葡萄糖苷酶分布。為從葡萄中提取葡萄糖苷酶和對葡萄酒的香氣研究提出一定的理論基礎和科學依據(jù)，并對葡萄酒的釀造工藝的優(yōu)化和完善提出科學建議。本試驗的主要研究結果如下： 1．

2、霞多麗漿果中β-葡萄糖菅酶的酶粗提液制備方法試驗探索了霞多麗漿果中的β-葡萄糖苷酶酶粗提液的制備方法。通過對冰浴和液氮研磨破碎葡萄材料，制備酶粗提液比較得出結論，制備粗酶液過程中采用冰浴破碎會使β-葡萄糖苷酶部分或者完全失活，檢測不到酶活或者酶活檢測結果不準確，而液氮研磨破碎葡萄材料，制備酶粗提液，檢測結果穩(wěn)定準確。本實驗采用液氮研磨制各酶粗提液。 2．霞多麗漿果中β-葡萄糖苷酶活性分析條件的建立。 本實驗通過對β-葡萄

3、糖苷酶活性測定方法電化法、熒光法、分光光度法等的比較研究，采用了以對硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-NPG)為酶反應底物的比色法檢測霞多麗漿果中的β-葡萄糖苷酶活性。以霞多麗漿果為材料，對β-葡萄糖苷酶活性分析條件進行的研究結果表明，PVP加入量對酶活性影響較大，當PVP加入量在0～4％范圍里，隨著PVP加入量的增大，酶活性呈上升的趨勢，當PVP加入量達到4％時，酶活性變化不再明顯，同時酶反應液澄清度不好，實驗選擇PVP加入量為3％

4、；緩沖液類型及pH值對酶活性也有較大影響。隨著pH值的增大，酶活性均呈現(xiàn)先增后減的趨勢，當pH為6.0時酶活性達到最大值。在相同pH條件下，檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液提取和反應的酶活性最大。酶的吸收波長分析結果表明，在波長在400～410 nm范圍里β-葡萄糖苷酶的反應生活物對-硝基苯酚能獲得最大的光吸收值，試驗選擇405 nm 為試驗檢測波長。酶促反應以37℃為宜，在此條件下反應120 min內酶活性分析結果最穩(wěn)定。據(jù)此和正交實驗分析得

5、出霞多麗漿果中β-葡萄糖苷酶提取測定條件為酶促反應溫度為37℃，反應時間為 90 min,β-葡萄糖苷酶提取和反應最適緩沖液及pH是檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液，pH 6.0，檢測波長為405 nm。 3．霞多麗漿果不同部位的。β-葡萄糖苷酶活性分布。 實驗采用以對硝基苯基-β-Dβ吡喃葡萄糖苷(p-NPG)為酶反應底物的比色法檢測霞多麗漿果不同部位的β-葡萄船苷酶活性，按照以上所得的活性分析條件鹼測酶活性。結果顯示，得到霞

6、多麗成熟種子的β-葡萄糖苷酶活性高于果皮、果肉，而果皮果肉的活性又高于果梗，其果實不同部位的β-葡萄糖苷酶活性差異極顯著，霞多麗漿果中果皮部分β-葡萄糖苷酶活性的99.0％的置信區(qū)間是9.2476(U/gFW)±0.5072，霞多麗漿果果肉部分β-葡萄糖苷酶活性的99.0％的置信區(qū)間是8.6586(U/gFw)±1.3703，霞多麗漿果果梗部分β-葡萄糖苷酶活性的99.0％的置信區(qū)間是2.6035(U/gFW)±0.3489,霞多麗漿果