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文檔簡介
1、目的:研究Rho/Rock信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在異丙腎上腺素(Isoproterenol ISO)誘導(dǎo)的大鼠心肌重塑中的作用及其機(jī)制。
方法:1、將30只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分成3組:空白對照組(空白組)、ISO模型組(模型組)、法舒地爾(Fas)組,每組10只。模型組、Fas組皮下多點(diǎn)注射ISO(5mg.kg-1.d-1×10d)建立大鼠心肌纖維化模型,給藥結(jié)束后Fas組給予法舒地爾(5mg.kg-1.d
2、-1)分兩次腹腔注射6周,模型組及對照組給予等量生理鹽水腹腔注射,共6周。
2、6周后,用10%水合氯醛麻醉后將大鼠處死,用電子天平準(zhǔn)確稱量大鼠體重(BW)、心臟重量(HW),計(jì)算各組心臟重量指數(shù)(HW/BW,即HWI);取左室心肌組織進(jìn)行蘇木素-伊紅(Hematoxylin-eosin,HE)染色、MASSON染色,觀察心肌細(xì)胞直徑(MD)及膠原纖維容積分?jǐn)?shù)(CVF)的變化;免疫組織化學(xué)方法(Immunohistochemi
3、stry,IHC)檢測心肌組織中轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)蛋白表達(dá)水平,計(jì)算平均光密度(Integral optical density, IOD);酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-LinkedImmunosorbent Assays,ELISA)檢測血清腦鈉肽(BNP)濃度;反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)檢測心肌組織中RhoA、R
4、ockmRNA的表達(dá)。
結(jié)果:1、大鼠一般情況:空白對照組:一般狀況良好,毛色有光澤,雙目靈活有神,行動(dòng)敏捷,對周圍變化反應(yīng)靈敏,攝食及飲水量可;模型組:大鼠后期毛色逐漸失去光澤,精神萎靡,行動(dòng)遲緩,喜蜷縮,攝食、飲水量減少;藥物干預(yù)Fas組一般狀況較模型組有明顯改善。試驗(yàn)期間,模型組大鼠死亡2只。其余組后未見大鼠死亡。
2、心臟重量指數(shù)(HWI)的測定:與空白組比較,模型組HWI(3.68±0.089 vs3.12
5、±0.078)明顯增高(P<0.01);與模型組比較,F(xiàn)as組HWI(3.50±0.118)顯著降低(均P<0.01)。
3、病理學(xué)檢測:HE染色顯示:空白組大鼠心肌結(jié)構(gòu)清晰,形態(tài)未見明顯異常。模型組大鼠心肌纖維排列紊亂,心肌細(xì)胞明顯腫大、排列紊亂,細(xì)胞核明顯增大變圓,肌絲紋理增粗;Fas組大鼠心肌病理學(xué)改變有明顯改善;與空白組比較,模型組MD(17.95±1.155 vs14.99±1.837)和CVF(5.67±0.414
6、 vs3.59±0.631)顯著升高(均為P<0.01);與模型組比較,F(xiàn)as組MD(16.50±1.119)和CVF(4.15±0.707)降低(分別為P<0.05、P<0.01)。
4、血清學(xué)指標(biāo)BNP檢測:與空白組比較,模型組BNP(181.54±42.636 vs63.44±29.971)明顯升高(P<0.01);與模型組比較,F(xiàn)as組(83.95±26.931)明顯降低(為P<0.01)。
5、免疫組織化學(xué)
7、染色方法觀察TGF-β1蛋白表達(dá):與空白組比較,模型組TGF-β1蛋白(IOD為29.27±3.683 vs8.45±2.533)表達(dá)明顯增高;與模型組比較,F(xiàn)as組(21.32±3.092)降低(均為P<0.01)。
6、RT-PCR法測RhoAmRNA和RockmRNA表達(dá):以β-actin為內(nèi)參對照,結(jié)果以RhoAmRNA、RockmRNA與β-actinmRNA灰度值的比值表示。與空白組比較,模型組RhoAmRNA(1
8、.36±0.068 vs0.51±0.046)、 RockmRNA(0.96±0.145 vs0.40±0.059)表達(dá)明顯上調(diào)(均為P<0.01);與模型組比較,F(xiàn)as組RhoAmRNA(0.69±0.129)、RockmRNA(0.56±0.104)明顯下調(diào)(均為P<0.01)。
結(jié)論:RhoA/Rock信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與ISO誘導(dǎo)大鼠心肌重塑中的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),阻滯RhoA/Rock信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可抑制TGF-β1和BNP
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