梓醇預處理對異丙腎上腺素誘導的大鼠心肌損傷的保護作用及相關機制的研究.pdf

1、前言：
　　 冠心病是臨床中關注的一個焦點,它是由于冠狀動脈供血與心肌需求不平衡導致的心肌損傷的急性狀態(tài),心肌缺血引起的損傷甚至壞死是冠心病的主要病理改變。它不僅在西方國家,而且在發(fā)展中國家是一個主要的公共健康問題。根據(jù)世界衛(wèi)生組織預測,到2020年它將是世界范圍內(nèi)死亡的主要原因。近些年,介入手術在心血管疾病治療方面取得很大進展,但是藥物治療仍然是心血管疾病的基石,因此開發(fā)新的抗心肌缺血藥物并探索抗心肌缺血機制仍是一項重要的研究

2、課題。
　　 炎癥是機體對損傷因子所產(chǎn)生的防御反應,是由多種細胞和細胞因子共同參與的復雜過程。它不僅參與感染性疾病的全過程,而且在非感染性疾病中也發(fā)揮十分重要的作用。目前國內(nèi)外的研究表明,冠心病、高血壓、心力衰竭、血脂異常、缺血再灌注損傷等疾病的發(fā)生發(fā)展都與炎癥反應有密切相關性。例如對CRP等炎癥因子的檢驗已經(jīng)作為衡量多種心血管疾病嚴重程度的重要指標。另外他汀類藥物的抗炎活性使其在心血管疾病的廣泛應用。
　　 異丙腎上腺

3、素是一種合成的兒茶酚胺,它能導致嚴重的心肌損傷。根據(jù)實驗以及臨床研究的相關證據(jù)表明:氧化應激、凋亡、炎癥反應與其心肌損傷密切相關,近年來被廣泛應用于心肌缺血的藥理學和藥效學研究。
　　 梓醇作為地黃中的主要有效成份,屬于環(huán)烯醚萜單糖類。相關研究表明梓醇具有多種生物學活性,如抗炎、抗氧化、抗凋亡、降血糖等多種生物學活性。目前關于對梓醇的研究主要集中在其對神經(jīng)系統(tǒng)的保護作用,對心血管系統(tǒng)的相關研究才剛剛起步。本課題組的前期研究發(fā)現(xiàn)梓

4、醇在細胞水平對心肌細胞也有保護作用。本實驗中我們進一步從炎癥角度來分析梓醇對的心肌損傷的作用,進一步為證實梓醇的心血管保護作用提供實驗基礎和理論基礎。
　　 在本實驗中我們觀察了梓醇對異丙腎上腺素誘導大鼠心肌損傷的作用并分析其潛在的心肌保護作用機制,探討其保護作用是否與減少TNF-α和IL-1β的表達,抑制NF-kB的活性及調(diào)節(jié)凋亡相關因子Bcl-2和Bax的表達有關。
　　 材料與方法：
　　 第一部分：

5、>　　 1、分組及給藥方法:
　　 將48只雄性wistar大鼠(12周齡)隨機分為六組,分別是:①正常對照組(Control組);②模型組(Model組);③陽性藥物對照組(17anshinoneⅡA組):;④低劑量梓醇組(Catalpol(L)組);⑤中劑量梓醇組(Catalpol(M)組);⑥高劑量梓醇組(Catalpol(H)組)。
　　 2、實驗內(nèi)容
　　 (1)動物模型制作:
　　 根據(jù)相關

6、文獻,連續(xù)兩天皮下注射異丙腎上腺素(85mg/kg.d)誘導心肌損傷模型。
　　 (2)各組大鼠血清LDH及CK-MB水平用自動生化分析儀檢測。
　　 (3)HE染色用以觀察各組大鼠心肌病理學改變并根據(jù)相關標準對損傷程度進行分級。
　　 (4)各組大鼠心肌TNF-α和IL-1β的mRNA表達用realtimeRT-PCR檢測。
　　 (5)各組大鼠心肌TNF-α和IL-1β的蛋白表達用免疫組織化學檢測。<

7、br>　　 (6)各組大鼠心肌NF-kBp65及IkB的蛋白表達用wetern-blot檢測。
　　 第二部分：
　　 (1)分組與第一部分相同。
　　 (2)透射電鏡檢測各組大鼠心肌細胞核的超微改變。
　　 (3)TUNEL檢測各組大鼠心肌細胞凋亡的情況,并計算凋亡系數(shù)。
　　 (4)realtimeRT-PCR檢測各組大鼠心肌組織凋亡相關因子Bax及Bcl-2的mRNA表達。
　　

8、(5)免疫組織化學檢測各組大鼠心肌組織凋亡相關因子Bax及Bcl-2的蛋白表達。
　　 (6)western-blot檢測各組大鼠心肌組織caspase-3(凋亡執(zhí)行者)的蛋白表達。
　　 統(tǒng)計分析：
　　 所有數(shù)據(jù)應用SPSS13.0進行統(tǒng)計分析,計量資料采用均數(shù)-x±標準差表示。多組間比較應用單因素方差分析(one-wayANOVA)統(tǒng)計,以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　 實驗結(jié)果：

9、　　 第一部分：
　　 (1)連續(xù)皮下注射異丙腎上腺素可以引起明顯的大鼠心肌組織損傷(心肌酶的升高和心肌組織的損傷改變)。
　　 (2)生化(血清LDH和CK-MB)和病理學(HE染色)檢測結(jié)果顯示:不同劑量的梓醇(2.5,5,10mg/kg)可以減輕異丙腎上腺素誘導的心肌損害,以中高劑量梓醇明顯。
　　 (3)與正常組比較,模型組大鼠心肌組織的TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表達明顯升高(P＜0.01)

10、。經(jīng)梓醇預處理后,尤其在中高劑量梓醇組,可以明顯減少心肌組織的TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表達。
　　 (4)大劑量異丙腎上腺素可以上調(diào)大鼠心肌細胞NF-kBp65的蛋白表達,減少IkB的表達,梓醇預處理可以逆轉(zhuǎn)這一改變,并呈劑量依賴性。
　　 第二部分：
　　 (1)透射電鏡結(jié)果顯示:梓醇可以阻止異丙腎上腺素誘導的大鼠心肌細胞核的染色質(zhì)邊集。
　　 (2)TUNEL檢測顯示:與正常對照組比較,

11、異丙腎上腺素可以明顯增加心肌細胞凋亡陽性細胞比例(2.25±0.58%vs32.2±4.79%,P＜0.01),經(jīng)梓醇預處理后,可以阻止這種改變。
　　 (3)與正常組比較,模型組大鼠心肌Bax的mRNA和蛋白表達明顯升高(P＜0.01),而Bcl-2明顯降低(P＜0.01)。梓醇預處理可以逆轉(zhuǎn)這種改變。
　　 (4)異丙腎上腺素可以增加大鼠心肌組織中caspase-3(凋亡執(zhí)行者)的蛋白表達,梓醇預處理可以呈劑量依賴性

12、的阻止這一改變。
　　 結(jié)論：
　　 (1)大劑量皮下注射異丙腎上腺素通過誘導心肌炎癥反應和凋亡可以引起明顯的大鼠心肌組織損傷。
　　 (2)梓醇預處理可以呈劑量依賴性的保護異丙腎上腺素誘導的大鼠心肌損傷。
　　 (3)梓醇的心肌保護作用機制部分與抑制大鼠心肌組織中TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表達,調(diào)節(jié)心肌組織中核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB的活性有關。
　　 (4)梓醇的抗凋亡作用與調(diào)節(jié)心肌組織