性腺激素對初情大鼠生殖軸上NKB、GnRH和Kisspeptin表達(dá)的影響.pdf

1、初情期啟動(dòng)的早與遲直接影響動(dòng)物的性成熟和以后的繁殖性能，但其機(jī)制仍不清楚。研究表明，在動(dòng)物初情期發(fā)育的調(diào)控中，下丘腦促性腺激素釋放激素（gonadotropin releasinghormone，GnRH）神經(jīng)元所分泌的GnRH是初情期啟動(dòng)的決定性因素。一般認(rèn)為，動(dòng)物在初情期之前，下丘腦GnRH神經(jīng)元對性腺類固醇激素的負(fù)反饋?zhàn)饔檬置舾校蚨诔錾蟮匠跚槠谇斑@段時(shí)間，下丘腦GnRH的分泌因受性腺類固醇激素的作用而一直處于抑制狀態(tài)，呈現(xiàn)

2、低幅度、低頻率的分泌脈沖；初情期的啟動(dòng)始于下丘腦性腺激素抑制機(jī)制的解除，但GnRH神經(jīng)元上并沒有性腺激素受體，那么，在性腺激素調(diào)節(jié)GnRH分泌機(jī)制中，應(yīng)該有對性腺激素敏感的其他中間神經(jīng)元介導(dǎo)性腺激素對GnRH的調(diào)節(jié)作用。近期研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)激肽B（neurokininB，NKB）和Kisspeptin神經(jīng)元上均有性腺激素受體的表達(dá)，二者均能促進(jìn)GnRH釋放和初情期啟動(dòng)。因此，探究動(dòng)物初情期啟動(dòng)中NKB、Kisspeptin、GnRH和性腺

3、激素受體間的關(guān)系尤為重要。
　　目前國內(nèi)外關(guān)于NKB、Kisspeptin和GnRH的研究，多集中于NKB、Kisspeptin和GnRH在不同物種中樞神經(jīng)系統(tǒng)上的定位和其與初情期的關(guān)系的研究，缺少對其在生殖軸上整體的定位研究以及對Kisspeptin、NKB和GnRH與性腺激素水平關(guān)系的研究。本試驗(yàn)以皮下埋植性腺激素、卵巢摘除等處理方法，以雌性SD大鼠為研究對象，采用免疫熒光三標(biāo)技術(shù)來觀察各個(gè)組大鼠生殖軸上NKB、Kisspep

4、tin和GnRH的分布情況，運(yùn)用Image J和Image-pro plus6.0軟件分別計(jì)數(shù)和測量各組大鼠生殖軸上NKB、Kisspeptin和GnRH的陽性細(xì)胞數(shù)和平均熒光強(qiáng)度，并分析其間的關(guān)系及變化規(guī)律。同時(shí)結(jié)合實(shí)時(shí)熒光定量PCR、酶聯(lián)免疫和放射性免疫等分析方法，來闡述NKB、Kisspeptin和GnRH在機(jī)體性腺激素水平改變時(shí)的變化及其三者間潛在的聯(lián)系，為進(jìn)一步研究NKB、Kisspeptin和GnRH在雌性大鼠生殖功能上的作

5、用及其機(jī)制提供科學(xué)的理論依據(jù)。
　　結(jié)果顯示：（1）E2（29±0.71d）、E2+P4（28±1.53d）、OVX+E2（30±0.38d）、OVX+E2+NKB（28±1.18d）和OVX+E2+P4+NKB（28±0.52d）組大鼠均比Oil（43±1.38d）組大鼠陰門開啟的時(shí)間顯著提前（P<0.01），且這五組間差異不顯著（P>0.05）。（2） NKB主要分布于大鼠下丘腦的弓狀核、室旁核和腹內(nèi)側(cè)核，腺垂體以及卵巢的黃體

6、細(xì)胞、卵泡膜、顆粒細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞上，且不同部位表達(dá)的熒光強(qiáng)度存在差異（P<0.05）。①大鼠弓狀核上的免疫熒光強(qiáng)度顯著高于室旁核和腹內(nèi)側(cè)核（P<0.05）。②卵巢摘除組的大鼠弓狀核上NKB陽性神經(jīng)元數(shù)顯著高于E2和E2+P4組（P<0.05），大鼠室周核上的NKB陽性細(xì)胞數(shù)目較少（P<0.05），且僅在OVX+E2+P4+NKB、OVX+E2+P4和E2+P4組中分布。③Oil組大鼠下丘腦和腺垂體上的NKB熒光信號(hào)顯著強(qiáng)于E2、E2+P

7、4、OVX+E2和OVX+E2+P4組（P<0.05）。④大鼠卵巢黃體細(xì)胞、卵泡膜和顆粒細(xì)胞上的平均熒光強(qiáng)度顯著高于間質(zhì)細(xì)胞（P<0.05）。（3）GnRH主要分布于大鼠下丘腦的正中隆起、弓狀核和視前區(qū)，且以正中隆起處的熒光信號(hào)最強(qiáng)（P<0.05）。①E2和E2+P4組大鼠，其下丘腦GnRH的陽性細(xì)胞數(shù)高于卵巢摘除大鼠（P<0.05）。②大鼠正中隆起處GnRH的平均熒光強(qiáng)度顯著高于弓狀核和視前區(qū)（P<0.05），且同一核團(tuán)上，E2和E2

8、+P4組大鼠GnRH的平均熒光強(qiáng)度值也較高（P<0.05）。（4）Kisspeptin主要分布于大鼠下丘腦弓狀核、室旁核、視前區(qū)和室周核。①Kisspeptin的陽性細(xì)胞數(shù)目以弓狀核最高，室旁核和視前區(qū)次之，室周核較少（P<0.05）。埋植性腺激素的大鼠室周核上Kisspeptin的陽性細(xì)胞數(shù)目增多（P<0.05）。（5） OVX+E2、OVX+E2+P4、OVX+Oil、OVX+E2+NKB、OVX+E2+P4+NKB和OVX+Oil

9、+NKB組大鼠下丘腦Tac-2、GnRH、Kiss-1的基因表達(dá)量顯著高于E2、E2+P4和Oil組（P<0.05）。OVX+E2+NKB、OVX+E2+P4+NKB和OVX+Oil+NKB組大鼠下丘腦ERα的基因表達(dá)量顯著高于E2、E2+P4和Oil。且ERα與Tac-2和GnRH基因表達(dá)呈正相關(guān)，而Kiss-1與ERα基因呈負(fù)相關(guān)。（6）Oil組大鼠血清中NKB的含量顯著高于OVX+E2和OVX+Oil組（P<0.05）。OVX+E

10、2+P4+NKB、OVX+E2+NKB和E2+P4組血清中NKB的含量差異不顯著（P>0.05）。 E2和OVX+Oil+NKB組大鼠血清中的NKB含量最低（P<0.05）。（7）E2+P4和E2組大鼠外周血液中的雌二醇濃度顯著高于其他各組（P<0.05），E2+P4、E2、OVX+E2+P4和Oil組大鼠血液中的孕酮含量最高（P<0.05）。（8）NKB與雌二醇的相關(guān)性系數(shù)值為-0.81423，呈高度負(fù)相關(guān)；NKB與孕酮的相關(guān)性系數(shù)值

11、為-0.478593，呈低度負(fù)相關(guān)。
　　根據(jù)以上結(jié)果得出結(jié)論：（1）雌二醇和NKB能夠誘導(dǎo)大鼠初情期啟動(dòng)時(shí)間提前。（2）NKB主要分布在大鼠下丘腦的弓狀核、室旁核和腹內(nèi)側(cè)核，腺垂體以及卵巢的黃體細(xì)胞、顆粒細(xì)胞、卵泡膜和間質(zhì)細(xì)胞上；Kisspeptin主要分布在大鼠下丘腦的弓狀核、室旁核和視前區(qū)；GnRH主要分布在大鼠下丘腦的正中隆起、弓狀核和視前區(qū)。且NKB、Kisspeptin在GnRH分布的關(guān)鍵區(qū)域弓狀核高度表達(dá)，提示NKB