脂多糖通過降低下丘腦Kisspeptin-GPR54系統(tǒng)表達抑制性腺軸功能和GnRH脈沖治療男性IHH生精療效分析.pdf

1、近十年的研究闡明:下丘腦Kisspeptin神經(jīng)元分泌Kisspeptin多肽，作用于促性腺激素釋放激素(Gonadotropin-releasing hormone，GnRH)神經(jīng)元上的Kisspeptin受體-GPR54，刺激GnRH分泌，進而調(diào)控垂體-性腺軸功能。下丘腦Kisspeptin-GPR54系統(tǒng)成為生殖內(nèi)分泌疾病病理生理機制研究以及臨床治療藥物開發(fā)應(yīng)用的熱門靶點。
　　本文第一部分，研究脂多糖(Lipopolysa

2、ccharide，LPS)對Kisspeptin-GPR54系統(tǒng)表達的影響，進而闡述LPS抑制性腺軸功能的病理生理機制;第二部分，比較GnRH脈沖輸注與人絨毛膜促性腺激素/人絕經(jīng)期促性腺激素(Human ChorionicGonadotropin/Human Menopausal Gonadotropin，HCG/HMG)聯(lián)合肌注治療男性特發(fā)性低促性腺激素性性腺功能減退癥(Idiopathic hypogonadotropic hypo

3、gonadism，IHH)生精的療效，并分析影響生精療效的因素。
　　第一部分:脂多糖通過降低下丘腦Kisspeptin-GPR54系統(tǒng)表達抑制性腺軸功能
　　研究背景:LPS可抑制性腺軸功能;但其病理生理學(xué)機制尚不清楚。LPS導(dǎo)致的應(yīng)激狀態(tài)（伴糖皮質(zhì)激素升高），也參與LPS抑制性腺軸功能。下丘腦Kisspeptin-GPR54系統(tǒng)統(tǒng)領(lǐng)調(diào)控下丘腦-垂體-性腺軸功能，可能介導(dǎo)LPS及其所致應(yīng)激狀態(tài)對性腺軸功能的抑制。
　

4、　研究目的:觀察LPS和地塞米松(Dexamethasone，Dex)對Kisspeptin-GPR54系統(tǒng)表達的影響。
　　研究方法:1.體外培養(yǎng)MCF7細胞系，用LPS（10μg/ml和20μg/ml）和Dex（10-6 mol/L和10-7 mol/L）干預(yù)72 h，評價干預(yù)6h、24 h、48 h和72 h后Kisspeptin和GPR54 mRNA(Real-Time PCR)和蛋白表達量（Western印跡）的變化;2

5、.成年雄性小鼠去勢4周后，檢測去勢前后LH水平和下丘腦視前區(qū)Kisspeptin和GPR54免疫組化表達;用LPS（100μ g/Kg）和Dex（1mg/Kg）干預(yù)去勢成年雄性小鼠4周，檢測干預(yù)前后LH水平和下丘腦視前區(qū)Kisspeptin和GPR54免疫組織化學(xué)染色變化。
　　研究結(jié)果:1.在MCF7細胞系中，和對照組相比，LPS（10μg/ml和20μg/ml）和Dex（10-6 mol/L和10-7 mol/L）均顯著降低K

6、isspeptin mRNA（P＜0.05）和蛋白表達;LPS（10μg/ml和20μg/ml）和Dex（10-6 mol/L和10-7 mol/L）均顯著增加GPR54 mRNA（P均＜0.05）和蛋白表達;2.與正常成年雄性小鼠比較，去勢4周后成年雄性小鼠LH水平顯著升高（P＜0.01），下丘腦Kisspeptin表達顯著增加(P＜0.05)，下丘腦GPR54表達無變化(P＞0.05)。在去勢成年雄性小鼠中，與對照組比較，LPS和D

7、ex均顯著降低去勢成年雄性小鼠LH水平（均P＜0.01）;LPS降低（P＜0.05）而Dex不改變(P＞0.05)去勢成年雄性小鼠下丘腦視前區(qū)Kisspeptin和GPR54免疫組織化學(xué)染色表達。
　　研究結(jié)論:LPS可以通過降低下丘腦Kisspeptin-GPR54系統(tǒng)表達抑制性腺軸功能。地塞米松不通過改變下丘腦Kisspeptin-GPR54系統(tǒng)表達發(fā)揮其抑制性腺軸功能。進一步支持Kisspeptin神經(jīng)元是成年雄性小鼠睪酮負

8、反饋調(diào)節(jié)作用部位。
　　第二部分:GnRH脈沖輸注與HCG/HMG聯(lián)合肌注治療男性IHH患者生精療效比較和影響因素分析
　　研究目的:比較GnRH脈沖式皮下輸注和HCG/HMG聯(lián)合肌注治療男性IHH的生精療效，并分析影響生精療效的因素。
　　研究方法:回顧性分析2010年5月至2014年10月在北京協(xié)和醫(yī)院內(nèi)分泌科門診就診的男性IHH患者92例。患者自愿選擇一種治療方案，并據(jù)此將92例IHH患者分成兩組:GnRH脈沖式

9、治療組(GnRH組，n=40); HCG/HMG聯(lián)合治療組（HCG/HMG組，n=52）。觀察GnRH組在治療后第1天、第3天、第5天、第7天和每月的LH及FSH水平;每月隨診觀察兩組患者血總睪酮(Serum totaltestosterone，TT)水平、睪丸體積(Testicular volume，TV)和精子生成例數(shù)的變化情況。并比較GnRH組和HCG/HMG組在治療過程中TT水平、TV、精子生成率和精子初現(xiàn)時間的差異;并分析影響

10、生精療效的因素。
　　研究結(jié)果:1.所有患者均治療3個月以上。GnRH組和HCG/HMG組隨訪中位時間分別為8.2(3.0-18.4)個月和9.2（3.0-18.6）個月，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.413)。2.GnRH組治療3天時，LH(0.5±0.6 vs.1.6±1.1 IU/L，P＜0.05)和FSH（1.3±1.1 vs.4.3±3.9 IU/L，P＜0.05）水平較治療前顯著升高。GnRH組治療2個月時與治療前比較，T

11、T（1.0±1.0 vs.8.2±7.3 nmol/L，P＜0.01）水平顯著升高，TV（2.3±1.5 vs.6.0±2.5ml，P=0.001）顯著增大。GnRH組患者末次隨診TT水平(7.4±5.2)nmol/L和TV(8.1±4.0)ml分別較治療前TT水平（1.0±1.0）nmol/L和TV（2.3±1.5）ml顯著升高和增大，均P＜0.01。HCG/HMG組末次隨診TT水平（14.4±8.0）nmol/L和TV（7.6±4.

12、2）ml分別較治療前TT水平（0.8±0.6）nmol/L和TV（2.3±2.1）ml顯著升高和增大，均P＜0.01。GnRH組和HCG/HMG組分別有20人(20/40，50.0％)和15人(15/52，28.8％)生成精子，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.038)。精子初現(xiàn)時間方面，GnRH組（6.5±3.1）月短于HCG/HMG組（10.8±3.7）月（P=0.001）。精子初現(xiàn)時，GnRH組和HCG/HMG組的TT水平分別為（9.

13、0±5.1）nmol/L和（14.8±8.8）nmol/L（P=0.034）。3.在GnRH組和HCG/HMG組，各自生成精子和未生成精子IHH患者基礎(chǔ)TV比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）;在GnRH組和HCG/HMG組，各自IHH患者Logistic回歸分析基礎(chǔ)TV對生精療效影響，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。
　　研究結(jié)論:GnRH脈沖式皮下輸注治療男性IHH比HCG/HMG聯(lián)合肌注更早產(chǎn)生精子。基礎(chǔ)睪丸體積不影