補(bǔ)腎活血方對(duì)血管性癡呆小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的:本研究在成功建立血管性癡呆(VD)小鼠動(dòng)物模型基礎(chǔ)上,觀察補(bǔ)腎活血方對(duì)VD小鼠腦組織堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)表達(dá)的影響,旨在從調(diào)節(jié)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(NTF)表達(dá),減輕腦缺血損傷,修復(fù)和保護(hù)神經(jīng)元的角度探討該藥對(duì)VD的治療作用機(jī)制,為臨床治療VD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 健康清潔級(jí)雄性昆明小鼠72只,體重35～40g,隨機(jī)抽取12只作為假手術(shù)組,其余60只隨機(jī)分為:模型

2、組、補(bǔ)腎活血高劑量組(簡(jiǎn)稱“高劑量組”)、補(bǔ)腎活血低劑量組(簡(jiǎn)稱“低劑量組”),尼莫地平對(duì)照組(簡(jiǎn)稱“對(duì)照組”),每組15只。
　　 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎,反復(fù)腦缺血再灌注的方法制備VD小鼠模型。造模結(jié)束后除去死亡小鼠,剩余只數(shù)分別為:假手術(shù)組12只,模型組9只,高、低劑量組各11只,對(duì)照組10只。造模結(jié)束后第2天各治療組分別按體重給藥治療,高、低劑量組分別以14.28g生藥/kg·d和7.14g生藥/kg·d灌服

3、補(bǔ)腎活血方水煎藥液,對(duì)照組以15.58 mg/kg·d灌服尼莫地平藥液,假手術(shù)組、模型組均灌服等劑量的0.5％的羧甲基纖維素鈉液,連續(xù)治療14 d。
　　 治療結(jié)束后,各組小鼠采用水迷宮法、跳臺(tái)法進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn),然后斷頭處死小鼠,冰盤上快速取腦,棄去嗅球及小腦,取右側(cè)大腦置于4％多聚甲醛固定,乙醇逐級(jí)脫水、透明、浸透、石蠟包埋,切片,0.1％硫堇染色,光學(xué)顯微鏡下觀察海馬病理形態(tài)變化;取左腦組織勻漿,提取上清,采用雙抗體夾心AB

4、C-ELISA法檢測(cè)腦組織bFGF和BDNF含量,采用RT-PCR法檢測(cè)bFGF mRNA和BDNF mRNA表達(dá)的變化。
　　 數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS for Windows13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示,統(tǒng)計(jì)方法采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用q檢驗(yàn),顯著性差異水平以0.05和0.01為標(biāo)準(zhǔn)。
　　 結(jié)果:
　　 1.各組小鼠行為學(xué)的比較
　　 1.1.各組小鼠水迷宮學(xué)習(xí)成

5、績(jī)的比較與假手術(shù)組比較,模型組游全程時(shí)間顯著延長(zhǎng),錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);與模型組比較,各治療組游全程時(shí)間顯著縮短,錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05或P＜0.01);高劑量組和低劑量組與對(duì)照組比較,學(xué)習(xí)成績(jī)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);高劑量組與低劑量組比較,學(xué)習(xí)成績(jī)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 1.2.各組小鼠水迷宮記憶成績(jī)的比較與假手術(shù)組比較,模型組游全程時(shí)間顯著延長(zhǎng),錯(cuò)誤次數(shù)明

6、顯增加,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。與模型組比較,各治療組游全程時(shí)間顯著縮短,錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05或P＜0.01);高劑量組與對(duì)照組比較,記憶成績(jī)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);低劑量組與對(duì)照組比較,學(xué)習(xí)成績(jī)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);高劑量組與低劑量組比較,學(xué)習(xí)成績(jī)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 1.3.各組小鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)成績(jī)的比較與假手術(shù)組比較,模型組小鼠的反應(yīng)時(shí)間顯著延長(zhǎng),錯(cuò)誤次數(shù)明顯增

7、加,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);與模型組比較,各治療組反應(yīng)時(shí)間縮短,錯(cuò)誤次數(shù)減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05或P＜0.01);與對(duì)照組比較,高劑量組反應(yīng)時(shí)間縮短,錯(cuò)誤次數(shù)減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);高劑量組與低劑量組比較,反應(yīng)時(shí)間明顯縮短,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);低劑量組與對(duì)照組比較,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 1.4.各組小鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)記憶成績(jī)的比較與假手術(shù)組比較,模型組小鼠的潛伏時(shí)間顯著縮短,錯(cuò)誤次

8、數(shù)明顯增加,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);與模型組比較,各治療組潛伏時(shí)間延長(zhǎng),錯(cuò)誤次數(shù)減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05或P＜0.01);高劑量組與對(duì)照組比較,潛伏時(shí)間延長(zhǎng),錯(cuò)誤次數(shù)減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);高劑量組與低劑量組比較,錯(cuò)誤次數(shù)減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);低劑量組與對(duì)照組比較,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 2.各組小鼠海馬錐體細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)的比較硫堇染色顯示,假手術(shù)組海馬輪廓清楚,CA1區(qū)錐

9、體細(xì)胞數(shù)目多,排列緊密,細(xì)胞核圓而大,核仁清晰,胞漿內(nèi)尼氏體豐富。模型組海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞數(shù)目明顯減少,排列稀疏,層次減少,胞漿內(nèi)尼氏體減少或消失,大部分細(xì)胞核體積變小、深染,結(jié)構(gòu)不清,呈核固縮表現(xiàn),有的呈三角形或多角形。高劑量組海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞僅有少量脫失,數(shù)目有所減少,排列較為緊密,層次較為清晰,有少數(shù)細(xì)胞核固縮。低劑量組和對(duì)照組小鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞部分脫失,數(shù)目減少,排列較稀疏,有部分細(xì)胞核固縮為三角形或多角形,低劑量組

10、優(yōu)于對(duì)照組。
　　 3.各組小鼠腦組織bFGF含量的比較與假手術(shù)組比較,模型組小鼠腦組織bFGF含量明顯升高,二者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。與模型組比較,各治療組小鼠腦組織bFGF含量均明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01),高劑量組與對(duì)照組比較,bFGF含量明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05),低劑量組與對(duì)照組比較,bFGF含量有升高趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);高劑量組與低劑量組比較,bFGF含量有升高趨勢(shì),但

11、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 4.各組小鼠腦組織BDNF含量的比較與假手術(shù)組比較,模型組小鼠腦組織BDNF含量明顯升高,二者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。與模型組比較,各治療組小鼠腦組織BDNF含量均明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05或P＜0.01);高劑量組與對(duì)照組比較,BDNF含量明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01),低劑量組與對(duì)照組比較,BDNF含量有升高趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);高劑量組與低劑量

12、組比較,BDNF含量明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 5.各組小鼠腦組織bFGF mRNA表達(dá)相對(duì)含量的比較與假手術(shù)組比較,模型組小鼠腦組織bFGF mRNA表達(dá)相對(duì)含量明顯升高,二者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);與模型組比較,各治療組bFGF mRNA表達(dá)相對(duì)含量均明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);高劑量組與對(duì)照組比較,bFGF mRNA表達(dá)相對(duì)含量明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);低劑量組與對(duì)照組

13、比較,bFGF mRNA表達(dá)相對(duì)含量明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);高劑量組與低照組比較,bFGF mRNA表達(dá)相對(duì)含量有升高趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 6.各組小鼠腦組織BDNF mRNA表達(dá)相對(duì)含量的比較與假手術(shù)組比較,模型組小鼠腦組織BDNF mRNA表達(dá)相對(duì)含量明顯升高,二者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);與模型組比較,各治療組BDNFmRNA表達(dá)相對(duì)含量均明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);

14、高劑量組與對(duì)照組比較,BDNF mRNA表達(dá)相對(duì)含量明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);低劑量組與對(duì)照組比較,BDNF mRNA表達(dá)相對(duì)含量明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);高劑量組與低照組比較,bFGF mRNA表達(dá)相對(duì)含量有升高趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 補(bǔ)腎活血方可改善實(shí)驗(yàn)性VD模型小鼠病理形態(tài)學(xué),促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶能力,其治療VD的機(jī)理之一是調(diào)節(jié)腦組織bFGFmRNA和BDNF