豬傳染性胸膜肺炎重組亞單位菌苗研究.pdf

1、豬傳染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia，PCP)是由胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)引起的以肺出血、壞死和纖維素性滲出為主要病變的高度接觸性傳染病。該病可致各年齡豬只發(fā)生急性和慢性感染，發(fā)病率和死亡率常在20％以上，最急性型死亡率可高達(dá)80％～100％，慢性豬傳染性膜肺炎潛伏于豬群內(nèi)，可使豬只生長緩慢，平均日增重下降，飼養(yǎng)報(bào)酬降低。

2、自1957年P(guān)attison首次報(bào)道本病以來，該病在世界范圍內(nèi)廣泛流行，給各國養(yǎng)豬業(yè)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。由于APP對多種抗生素都易產(chǎn)生耐藥性，所以疫苗接種是防制本病的主要措施。目前，國內(nèi)主要使用滅活疫苗預(yù)防和控制本病，但由于APP血清型較多，滅活疫苗對不同血清型APP的交叉保護(hù)效果十分有限，因此新型疫苗的開發(fā)已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。 研究表明，通過分子生物學(xué)手段構(gòu)建的一些PCP弱毒疫苗和新興起的一種ghost疫苗較滅活疫苗的免疫保護(hù)

3、效果有明顯提高，但這兩種疫苗也存在一定問題，弱毒疫苗隨著毒力降低，其免疫原性也有所降低，且存在毒力返強(qiáng)的可能性；ghosts疫苗則存在菌體裂解不徹底等缺點(diǎn)。以APP主要毒力因子為組份的亞單位疫苗則不存在上述缺點(diǎn)，也可提供較高的保護(hù)水平，但是由于亞單位疫苗中不含有全菌體成分，所以疫苗的抑菌作用十分有限，感染的豬只雖不表現(xiàn)癥狀，但可隱性感染而成為病原攜帶者。 鑒于此，本試驗(yàn)將通過基因工程方法重組表達(dá)的APP六種毒力因子分別添加到AP

4、P7滅活苗中，希望添加的重組蛋白成分能夠提高滅活苗的交叉保護(hù)力，從而篩選出具有較好保護(hù)效果的重組亞單位菌苗組合，為今后APP新型疫苗的研究提供依據(jù)。 本研究將已經(jīng)重組表達(dá)的APP六種主要毒力因子蛋白(rApx Ⅰ、rApxⅡ、rApxⅢ、rOMP、rApxⅣ和rApfA)與APP7滅活苗進(jìn)行如下組合：試驗(yàn)Ⅰ組(滅活苗)、試驗(yàn)Ⅱ組(滅活苗+rApx Ⅰ+rApxⅡ+rApxⅢ+rOMP)、試驗(yàn)Ⅲ組(滅活苗+rApx Ⅰ+rApxⅡ

5、+rApxⅢ+rApxⅣ)、試驗(yàn)Ⅳ組(滅活苗+rApx Ⅰ+rApxⅡ+rApxⅢ+rApfA)和對照組(PBS)，進(jìn)行小鼠的免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)。免疫共分3次，每次間隔2周。第3次免疫后第7天，分別以APPl型菌(5×10<'9>cfu)和APP7型菌(10<'11>cfu)進(jìn)行攻毒。通過檢測血清特異性抗體和脾臟T淋巴細(xì)胞增殖能力的動態(tài)變化，結(jié)合攻毒后小鼠的保護(hù)率、肺臟病理變化及間接免疫熒光抗原定位，綜合評價(jià)重組亞單位菌苗的免疫保護(hù)效果。

6、結(jié)果顯示試驗(yàn)Ⅰ組的OMP抗體、試驗(yàn)Ⅱ組的ApxI和OMP抗體、試驗(yàn)Ⅲ組的ApxI抗體、試驗(yàn)Ⅳ組的菌毛抗體均處于較高的水平，攻毒前與其它各組均有顯著差異(p<0.05)；試驗(yàn)Ⅱ組的細(xì)胞免疫水平在攻毒前與試驗(yàn)Ⅰ、Ⅳ兩組及對照組有了極顯著差異(p<0.01)，與試驗(yàn)Ⅲ組有顯著差異(p<0.05)；小鼠攻毒后保護(hù)率、肺臟病變及肺臟抗原定位的結(jié)果與體液和細(xì)胞免疫檢測結(jié)果基本一致，試驗(yàn)Ⅱ組最優(yōu)，試驗(yàn)Ⅲ、Ⅳ兩組次之，試驗(yàn)Ⅰ組在試驗(yàn)組中最差，僅好于對照