豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定及其APXⅣA基因的PCR檢測.pdf

1、本研究采用以牛腦心浸液為基礎(chǔ)的液體培養(yǎng)基和巧克力平板接種方法，從某豬場典型傳染性胸膜肺炎癥狀豬的肺臟和扁桃體中分離到1株具有多形性的革蘭氏陰性球桿菌。培養(yǎng)特性、生物學(xué)特性和生化鑒定結(jié)果表明，該分離菌為豬胸膜肺炎放線桿菌(APP)。采用瓊脂擴散試驗(GDT)方法，血清型鑒定為1型。　　致病性試驗表明，分離菌對小白鼠有強致病力，LD50測定為7.2×108CFU。滴鼻感染6頭30日齡仔豬，每頭7.2×109CFU/5Kg，癥狀表現(xiàn)為咳嗽，

2、噴嚏，呼吸極度困難；剖檢的特征性病變?yōu)榉闻K萎縮，并與橫隔膜粘連；心包膜與胸膜和橫隔膜粘連，并與肺臟有不同程度的粘連。對試驗豬進行胸膜肺炎放線桿菌分離發(fā)現(xiàn)，接種后60h在兩頭豬血液中分離到APP，72h在5頭豬的血液中分離到APP，糞便里不能分離到病原。　　根據(jù)GenBank上公布的豬胸膜肺炎放線桿菌的APXⅣA基因序列，設(shè)計一對引物，篩選最佳反應(yīng)參數(shù)，建立了豬傳染性胸膜肺炎的PCR診斷方法。以胸膜肺炎放線桿菌血清1型、3型和7型標(biāo)準(zhǔn)菌

3、株、本研究所分離的APP，實驗室保存的沙門氏菌、葡萄球菌、鏈球菌、巴氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)株提取的DNA為模板進行PCR檢測。結(jié)果表明，APP標(biāo)準(zhǔn)株、分離菌株均檢測到APXⅣA基因，擴增出的特異片段大小約400bp，而其它對照菌均未檢出。　　提取試驗豬血、糞和組織中的DNA，用PCR方法檢測APXⅣA基因，結(jié)果表明，接種后36h可以在血液中用PCR方法檢測到該基因，檢出率4/6；60h后可以從所有接種豬體內(nèi)的血液中檢測到該基因，檢出率6/6。糞樣