白三烯B4通過MAPK信號上調HPA軸糖皮質激素受體和CRH的表達.pdf

1、研究背景和研究目的:盡管炎癥因子在病理過程中的作用得到了認識,但是炎癥因子在生理性功能和應激狀態(tài)下的作用卻了解甚少。支氣管哮喘是一種炎癥性疾病。很多輕度哮喘患者在不經(jīng)治療的情況下可以很快中止發(fā)作或自愈。這種現(xiàn)象有待于解釋。我們前期研究表明致敏大鼠抗原攻擊后腦和肺組織中的細胞因子和白三烯B4(Leukotriene B4,LTB4)同步升高。腦室內注射LTB4可抑制哮喘肺功能下降和肺組織炎性浸潤變化,這些作用與LTB4刺激下丘腦促腎上腺皮

2、質激素釋放激素(cortieotrophin-releasinghormone,CRH)mRNA和蛋白表達,增加血漿內促腎上腺皮質激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)和腎上腺皮質激素(corticosterone,CORT)水平有關,上述作用可被LTB4的拮抗劑所阻斷,提示LTB4在哮喘發(fā)作過程中可能起負反饋調節(jié)作用。為此,我們進一步研究了哮喘模型大鼠LTB4下丘腦定位注射對下丘腦、垂體、腎上腺和肺組

3、織糖皮質激素受體(Glucocorticoid receptor,GR)和CRH mRNA和蛋白表達的影響,并通過LTB4刺激PC12細胞株表達GR和CRH mRNA和蛋白,研究其信號通路。
　　 方法:采用卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏SD大鼠,反復攻擊復制大鼠哮喘模型,在抗原攻擊前通過下丘腦定位注射的方法對清醒的致敏大鼠注射LTB4、LTB4受體1拮抗劑(BLT1)U75302及LTB4受體2拮抗劑(BLT2)L

4、Y255283,末次抗原攻擊半小時后取下丘腦、垂體、腎上腺和肺提取RNA和蛋白。
　　 分別取正常大鼠和哮喘模型大鼠的下丘腦,腺垂體組織進行體外培養(yǎng),以LTB4刺激下丘腦、腺垂體組織塊,加LTB4受體拮抗劑進行預處理。采用RT-PCR,Real-timePCR和westem blot的方法測定各組織中GR和CRH mRNA和蛋白表達。
　　 采用大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC12細胞株作為研究的模型,用LTB4刺激PC12細胞

5、表達GR和CRH mRNA和蛋白,以多種信號途徑的抑制劑如Erk1/2、JNK、NF-KB抑制劑等預處理,研究LTB4誘導的GR和CRH表達時的MAPK、PI3K-AKT和JAK-STAT信號通路。
　　 結果:(1)在體外組織塊培養(yǎng)的試驗中,正常大鼠和哮喘模型大鼠下丘腦、垂體和腎上腺組織塊經(jīng)LTB4刺激后,GR和CRH的mRNA表達顯著增加,用BLT1受體拮抗劑U7530210-7mol/L進行預處理后,能顯著的抑制LTB4誘

6、導的GR和CRHmRNA表達的上升。而用BLT2受體拮抗劑LY25528310-7mol/L進行預處理后只能部分拮抗LTB4誘導的GR和CRHmRNA表達的上升。
　　 (2)在整體下丘腦定位注射試驗中,致敏大鼠單獨進行OVA攻擊均能顯著增加HPA軸(hypothalamus-pimitary-adrenal axis,HPA axis)下丘腦、垂體和腎上腺GR和CRH的表達。下丘腦定位注射LTB4能進一步增加OVA攻擊誘導的G

7、R和CRHmRNA的表達。U75302100ng進行預處理后,能顯著的抑制LTB4誘導的GR和CRH mRNA表達的上升。而BLT2抑制劑LY255283100ng進行預處理后只能部分抑制LTB4誘導的GR和CRH mRNA和蛋白表達的上升。不同的是,各處理組肺組織GRmRNA的表達無顯著差異。
　　 (3)LTB4呈劑量依賴性的上調PC12細胞GR和CRH的表達。用U7530210-7mol/L進行預處理后,能顯著的抑制LTB

8、4誘導的GR和CRH mRNA和蛋白表達的上調,而用LY25528310-7mol/L進行預處理后只能部分抑制LTB4誘導的GR和CRHmRNA和蛋白表達的上升。
　　 (4)MAPK信號通路的抑制劑(Erk1/2抑制劑U012610μM或JNK抑制劑SP60012510μM)預處理,明顯抑制LTB4誘導PC12細胞表達GR和CRH mRNA。NF-KB抑制劑PDTC(10μM)預處理能顯著抑制LTB4誘導的CRH mRNA表達

9、的上升,但不抑制GR mRNA表達。P38抑制劑SB202190(10μM)預處理能顯著抑制LTB4誘導的GR蛋白表達的上調,但PDTC、U0126、SP60012510μM對LTB4誘導的GR蛋白表達上調的抑制不明顯。此外,LTB4刺激PC12細胞激活MAPK通路中Erk1/2、JNK和p38磷酸化,但不能激活PI3K-AKT和JAK-STAT通路。
　　 結論:上述結果提示:LTB4與BLT1受體結合,可能通過激活MAPK通