綿茵陳藥材的提取、精制工藝及其“譜效結(jié)合”評價研究.pdf

1、茵陳為《中華人民共和國藥典》(2005版)收載品種，是保肝利膽復方中常用中藥。目前在中藥制劑工藝中多采用傳統(tǒng)水煎工藝，個別制劑采用“水提醇沉”或乙醇滲漉工藝，未見對上述提取工藝評價的系統(tǒng)文獻研究。 現(xiàn)代科學技術不斷發(fā)展的背景下，在中藥制備工藝中適宜的引進新的制劑技術，并對其作出科學的評價，對提高中成藥的技術含量和科學內(nèi)涵具有重要意義。 以單一成分保留率為指標的常用工藝評價方式，應用于多成分多部位的中藥具有局限性，籠統(tǒng)的有

2、效部位的評價方式具有模糊性。中藥指紋圖譜技術的發(fā)展為跟蹤評價中藥制劑工藝中藥效物質(zhì)基礎的保留提供了更為精細的指標。即使如此，嚴謹?shù)难芯空呷杂欣碛少|(zhì)疑，保留指紋圖譜相關成分的同時，新工藝的運用是否保留了藥材的藥效。因此以“譜效結(jié)合”的方法，從物質(zhì)基礎和藥效學的角度跟蹤評價中藥制劑新工藝，具有更強的說服力。 本課題以綿茵陳藥材為載體，探索大孔樹脂吸附工藝的運用及其科學評價的途徑。針對綿茵陳藥材的研究基礎，在建立綿茵陳藥材指紋圖譜和探

3、討藥材提取液中綠原酸穩(wěn)定性影響因素基礎上，以綿茵陳藥材指紋圖譜主峰保留率和保肝的藥效學評價為指標，研究了綿茵陳提取工藝、大孔吸附樹脂精制工藝，主要研究內(nèi)容和成果如下： 1.綿茵陳藥材指紋圖譜的建立 采用反相高效液相色譜法建立綿茵陳藥材指紋圖譜，并進行相應的方法學考察，對不同產(chǎn)地和批次綿茵陳藥材進行質(zhì)量評價。 2.綿茵陳藥材提取液中綠原酸穩(wěn)定性的影響因素研究 采用HPLC法測定綿茵陳藥材水提液、醇提液在不同

4、受熱時間和溫度，以及不同pH條件下綠原酸的含量變化。結(jié)果表明，受熱溫度和pH是影響其中綠原酸穩(wěn)定性的重要因素。提示在該藥材提取、濃縮、干燥工藝過程中應關注受熱溫度和pH對綠原酸保留率的影響。 3.綿茵陳藥材的提取工藝研究 選擇綿茵陳藥材指紋圖譜中代表不同極性的綠原酸峰、8號峰和13號峰為指標成分，以三種成分的提取率進行多指標綜合評分，對提取次數(shù)進行考察的基礎上；再采用四因素三水平正交實驗設計法考察綿茵陳藥材的提取工藝參數(shù)

5、；進一步以抗急性肝損傷的藥效學研究，對所選優(yōu)化工藝與傳統(tǒng)水提工藝進行比較。結(jié)果表明，綿茵陳藥材提取的優(yōu)化工藝參數(shù)為10倍量、8倍量、8倍量的80％乙醇各提取1次，每次1h；ALT和AST以及病理學指標的比較表明綿茵陳醇提工藝有優(yōu)于水提工藝的趨勢。 4.綿茵陳藥材的大孔樹脂精制工藝研究 本課題先以靜態(tài)吸附法確定樹脂種類及吸附工藝影響因素。以吸光度和綠原酸的比吸附量為指標，考察不同樹脂的吸附效果和綿茵陳提取液在F樹脂的吸附時

6、間曲線；采用析因?qū)嶒炘O計，考察上柱藥液濃度和pH對綠原酸吸附的影響；以綿茵陳提取液和洗脫液的HPLC指紋圖譜為指標，考察其精制效果。結(jié)果表明，不同樹脂對綿茵陳提取液中成分的吸附效果有差異，F(xiàn)型樹脂吸附效果最佳；綿茵陳提取液在F型樹脂的吸附平衡時間為6h；上柱藥液濃度和pH是影響吸附的重要因素。該結(jié)果可為綿茵陳提取液的大孔樹脂精制工藝路線的確定提供依據(jù)。 在以上研究基礎上，以綿茵陳藥液中綠原酸、吸光度結(jié)合HPLC指紋圖譜為指標，考

7、察其在F樹脂的動態(tài)吸附及洗脫過程，確定最大上樣量以及洗脫溶媒種類和用量。結(jié)果表明，綿茵陳提取液在該樹脂的最大上樣量以綠原酸計為20.9mg/g干樹脂，并確定3倍柱體積80％乙醇為洗脫溶媒；重復驗證實驗表明該工藝在有效保留HPLC指紋圖譜主峰的同時，使提取液的得膏率由17％降低到2.5％，該精制工藝路線達到了富集有效成分的目的。 5.“譜效結(jié)合”方法對綿茵陳精制工藝的評價研究 以HPLC指紋圖譜的主峰保留率為指標，對綿茵陳

8、提取液的精制工藝進行評價；建立CCL4致小鼠急性肝損傷模型，測定血清中ALT、AST等指標，并對其肝組織切片進行病理學觀察，對綿茵陳提取液精制前后的保肝作用進行比較；進行小鼠灌胃給藥的急性毒性實驗，考察綿茵陳提取液精制前后口服給藥的安全性差異。結(jié)果表明，綿茵陳提取液精制前后的HPLC指紋圖譜基本一致；綿茵陳提取液精制前后的保肝作用無顯著差異；綿茵陳提取液精制前后均未發(fā)現(xiàn)明顯的急性毒性反應。 以上研究結(jié)果，初步表明通過優(yōu)化綿茵陳藥