苦丁茶抑菌活性及其紅外譜效關(guān)系研究.pdf

1、目的：本課題以廣西苦丁茶作為研究對象，考察苦丁茶不同極性部位對革蘭氏陰性菌、陽性菌的抑制作用，確定苦丁茶抑菌活性的藥效部位，為研究苦丁茶抑菌活性成分提供依據(jù)；利用響應面分析法，以苦丁茶水提物抑菌活性為指標，對苦丁茶水提物的提取工藝進行了優(yōu)化；研究苦丁茶中抑菌活性成分不同采收月份的動態(tài)累積規(guī)律，為確定適宜的采收期、合理開發(fā)利用其植物資源提供科學依據(jù)；同時將苦丁茶紅外指紋圖譜與抑菌活性之間的譜效關(guān)系，以闡明相關(guān)物質(zhì)基礎，建立一種操作簡便、客

2、觀有效的評價苦丁茶內(nèi)在質(zhì)量的新模式。
　　方法：(1)采用系統(tǒng)溶劑提取法得到7個不同極性部位，通過96孔板測定不同極性部位的最低抑菌濃度（MIC），杯碟法測定其抑菌圈直徑，并通過HPLC分別測定其中槲皮素、山柰素含量，苯酚硫酸法測定多糖含量，分析3種物質(zhì)含量與抑菌能力之間的關(guān)系，并確定苦丁茶抑菌活性物質(zhì)的提取方法。(2)在單因素試驗基礎上，選擇提取溫度、提取時間和液料比三因素為自變量，以杯碟法測定苦丁茶水提物對大腸桿菌、金黃色葡萄

3、球菌、綠膿桿菌的抑菌圈直徑為響應值，根據(jù)中心組合(Box-Behnken)試驗設計原理,采用三因素三水平的響應面分析法優(yōu)化苦丁茶抑菌活性成分提取工藝研究。(3)不同采收期的苦丁茶葉水浴回流提取3次，用杯碟法分別測定其對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌3種菌的抑菌圈直徑，比較不同采收期苦丁茶水提物抑菌圈直徑大小，確定最佳采收期，通過苯酚硫酸法測定不同采收期苦丁茶提取物中多糖含量，分析多糖含量與苦丁茶抑菌能力之間相關(guān)性。(4)采用近紅外漫

4、反射光譜技術(shù)，以不同產(chǎn)地苦丁茶為樣本，建立不同產(chǎn)地苦丁茶水提物的紅外指紋圖譜庫，并測定苦丁茶水提物對革蘭氏陰性菌、革蘭氏陰性菌的抑菌活性，運用數(shù)理統(tǒng)計方法將藥理數(shù)據(jù)與紅外指紋圖譜進行相關(guān)性研究，建立相關(guān)性回歸模型。
　　結(jié)果：(1)不同極性部位抑菌結(jié)果顯示石油醚無抑菌活性，氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物抑菌活性中等，乙醇、甲醇抑菌活性強，水提取物的抑菌活性最強。通過3種物質(zhì)含量與苦丁茶抑菌能力之間相關(guān)性比較推測槲皮素、多糖類為苦丁茶

5、抑菌活性成分。(2)苦丁茶水提物中抑菌活性成分提取的最佳工藝條件為︰回流提取、提取溫度98℃、提取時間2.4h、料液比1︰60 g·mL-1。在此條件下提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌的抑菌圈直徑達20.37mm、24.83mm、29.35mm。(3)在一年的不同月份生長期內(nèi)，苦丁茶水提物對3種菌的抑制作用均有顯著性差異，4月份苦丁茶水提物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌的抑菌圈直徑為全年最大值，12月份苦丁茶水提物的抑菌

6、圈直徑為全年最小值?？喽〔枰志钚猿煞?月份含量最高，為最佳采收期。苷類和多糖為苦丁茶抑菌活性成分。(4)采用后退法建立多元線性回歸方程，紅外光譜中19個指紋峰，有15個對大腸桿菌的關(guān)系方程有顯著貢獻（P<0.05），大腸桿菌的譜效關(guān)系式為：Y=-111.436-144.584 X1+97.856 X3+96.027 X4+64.34 X5－83.72 X6-118.229 X7＋141.886 X8-25.663 X9-12.12 X

7、10+19.58 X11－12.098 X12＋33.067 X13+31.289 X15+46.206 X16(P<0.05, R=0.952)有11個對金黃色葡萄球菌的關(guān)系方程有顯著貢獻，金黃色葡萄球菌的譜效關(guān)系式為：Y=24.862－72.355 X1＋168.465 X3-75.447 X7+132.753 X8－15.572 X12+53.171 X13＋14.905 X14+37.644 X15+48.743 X16+3.3

8、35 X17+18.88 X19(P<0.05,R=0.926)有12個對綠膿桿菌的關(guān)系方程有顯著貢獻，綠膿桿菌的譜效關(guān)系為：Y=137.561-315.929X2+400.182X3-157.634X5－30.459X6＋72.051X8＋5.023 X10－30.016 X11－53.736X12＋162.242X13－146.465X14(P<0.05, R=0.952)經(jīng)過7批藥材驗證，譜效關(guān)系模型的預測值和實際值的偏差率不超過