粵東地區(qū)蚊蟲及其天敵臺(tái)灣小劃蝽研究.pdf

1、研究背景和目的：廣東省是蚊媒性疾病高發(fā)區(qū)，掌握蚊蟲區(qū)系資料，對(duì)于蚊媒病的防治有重要意義。目前粵東地區(qū)蚊蟲區(qū)系資料少而陳舊，可參考的記載不確切，記錄不規(guī)范，為掌握蚊蟲基本情況，對(duì)粵東地區(qū)蚊種進(jìn)行調(diào)查，調(diào)查中發(fā)現(xiàn)一種蚊幼蟲天敵，經(jīng)鑒定為臺(tái)灣小劃蝽（Micronecta formosana Matsumura ），屬于半翅目（Hemiptera ）、蝎蝽下目（Nepomorpha ）、劃蝽科（Corixidae ）、小劃蝽屬（Micronec

2、ta ）的昆蟲。GenBank 數(shù)據(jù)庫檢索沒有關(guān)于臺(tái)灣小劃蝽基因序列的信息，而且劃蝽科的進(jìn)化地位以及蝎蝽下目各科之間的進(jìn)化關(guān)系仍有爭(zhēng)議。本研究主要對(duì)廣東省粵東地區(qū)蚊蟲種類及分布進(jìn)行調(diào)查，同時(shí)探索臺(tái)灣小劃蝽作為新的蚊蟲生物防治物種的應(yīng)用潛力、臺(tái)灣小劃蝽及其所屬的劃蝽科的進(jìn)化地位、蝎蝽下目各科之間的進(jìn)化關(guān)系。
　　 蚊蟲傳播疾病能力與唾液腺密切相關(guān)，不同蚊種傳播疾病能力不同，蚊蟲唾液為蚊傳播疾病之病原體載體。本研究以白紋伊蚊和騷擾阿

3、蚊作為研究對(duì)象，初步探討蚊蟲傳播疾病與唾液腺蛋白之間的關(guān)系。
　　 實(shí)驗(yàn)方法
　　 （1 ）本研究自2007年9 月至2009年11 月期間，于廣東省粵東地區(qū)8個(gè)采集中心，進(jìn)行14 次野外采集蚊幼蟲和蛹，幼蟲和蛹帶回實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)，成蚊制備針插標(biāo)本、雄蚊尾器和四齡幼蟲制備玻片標(biāo)本，主要根據(jù)四齡幼蟲和成蚊進(jìn)行蚊種鑒定。
　　 （2 ）實(shí)驗(yàn)室觀察臺(tái)灣小劃蝽其對(duì)韋氏庫蚊（Culex. Wilfedi Edwards ）、乳

4、點(diǎn)伊蚊（Aedes.macfarlanei Colless ）和白紋伊蚊（Ae.albopictus Skuse ）不同蚊齡幼蟲捕食偏好和捕食能力。同時(shí)于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)觀察臺(tái)灣小劃蝽在河水、河水稀釋液和孳生地水等不同水體中的生存能力。
　　 （3 ）PCR 擴(kuò)增臺(tái)灣小劃蝽核糖體基因（18S rDNA和28S rDNA ），利用MAGE 4.0 對(duì)臺(tái)灣小劃蝽和NCBI 上可利用的蝎蝽下目11個(gè)科的43個(gè)物種和2個(gè)外群物種（Mesovel

5、iafurcata Mulsant and Rey和Saldula saltatoria Linnaeus ），依據(jù)28S rRNA 序列特征構(gòu)建分子進(jìn)化樹。
　　 （4 ）利用雙向電泳技術(shù)對(duì)白紋伊蚊和騷擾阿蚊成蚊唾液腺蛋白種間差別和性別差別進(jìn)行差異蛋白分析。
　　 結(jié)果
　　 （1 ）本調(diào)查共發(fā)現(xiàn)10種蚊蟲：致倦庫蚊(Cx.pipiens quinque fasciatus Say)、類迷走庫蚊（Cx.torr

6、entium Martini ）、三帶喙庫蚊(Cx.tritaeniorhynchus Giles ）、白胸庫蚊(Cx.pallidothorax Theobald ）、薛氏庫蚊（Cx.shebbearei Barraud ）、韋氏庫蚊、白紋伊蚊、乳點(diǎn)伊蚊、騷擾阿蚊（Armigeres subalbatus Coquillett ）和褐尾路蚊(Lutzia fuscanusWiedemann)。其中白紋伊蚊采集頻率最高為11/14,其次

7、為騷擾阿蚊7/14和褐尾路蚊6/14。
　　 （2 ）臺(tái)灣小劃蝽捕食習(xí)性特異，通常輪番攻擊或多只圍捕蚊幼蟲，24 h 捕食觀察：臺(tái)灣小劃蝽對(duì)韋氏庫蚊捕食能力強(qiáng)于對(duì)乳點(diǎn)伊蚊的捕食能力（p＜0.017 ）。但是，對(duì)韋氏庫蚊捕食能力與對(duì)白紋伊蚊的捕食能力無差異、對(duì)白紋伊蚊的捕食能力與對(duì)乳點(diǎn)伊蚊的捕食能力也無差異（p＞0.017 ）；對(duì)1～2 齡蚊幼蟲的捕食能力強(qiáng)于對(duì)3～4 齡幼蟲和蛹的捕食能力（分別為p＜0.003和p＜0.017 ）

8、，對(duì)3～4 齡蚊幼蟲的捕食能力和對(duì)蛹的捕食能力無差異。
　　 臺(tái)灣小劃蝽在10 -4、10 -3、10 -2、10 -1 河水稀釋液與孳生地水中生存能力無差別（p＞0.05 ），在河水原液與與孳生地水中生存能力有差別（P<0.05 ）。
　　 （3 ）PCR 擴(kuò)增臺(tái)灣小劃蝽1 段18S rDNA和2 段28S rDNA 核糖體序列，GenBank 序列號(hào)分別為：HM038007、HM038008和HM038009。分子進(jìn)

9、化分析顯示臺(tái)灣小劃蝽與Diaprepocoris barycephalus Kirkaldy 同源性最高（92.8%）。劃蝽科與蓋蝽科和潛蝽科為姊妹群關(guān)系。蝎蝽下目下11個(gè)科可歸為6個(gè)總科,其中劃蝽科歸為劃蝽總科、蓋蝽科和潛蝽科歸為潛蝽總科、鞘喙蝽科和仰蝽科歸為仰蝽總科、涉水蝽科和蚤蝽科歸為涉水蝽總科、蜍蝽科和蟾蝽科歸為蜍蝽總科、負(fù)蝽科和蝎蝽科歸為蝎蝽總科。
　　 （4 ）唾液腺蛋白分析：雙向電泳結(jié)果顯示白紋伊蚊成蚊有8個(gè)唾液腺

10、蛋白是雌蚊特有的，其中3個(gè)蛋白也存在于騷擾阿蚊中雌蚊唾液腺，其余5個(gè)唾液腺蛋白只存在于白紋伊蚊雌蚊唾液腺。
　　 結(jié)論
　　 （1 ）本調(diào)查對(duì)粵東地區(qū)蚊蟲的種類和分布增加了新的資料，并發(fā)現(xiàn)3種廣東省未記錄蚊種。調(diào)查顯示：白紋伊蚊、騷擾阿蚊和褐尾路蚊為汕頭地區(qū)的居民區(qū)優(yōu)勢(shì)蚊種。采集到的重要傳播疾病媒介有白紋伊蚊(登革熱與基孔肯亞媒介等)、致倦庫蚊（淋巴絲蟲病和日本腦炎）、三帶喙庫蚊（日本腦炎）和騷擾阿蚊（犬惡絲蟲?。@提

11、示我們要加大對(duì)粵東地區(qū)以上蚊媒疾病的預(yù)防和監(jiān)測(cè)力度。
　　 （2 ）野外和實(shí)驗(yàn)室觀察均證明：臺(tái)灣小劃蝽對(duì)不同種和不同齡期蚊蟲均有捕食能力，在而且在不同水體中有廣泛的適應(yīng)能力，對(duì)蚊蟲生物防治具有一定價(jià)值。
　　 （3 ）劃蝽科與蓋蝽科和潛蝽科為姊妹群關(guān)系。蝎蝽下目中爭(zhēng)議較多的四個(gè)科：涉水蝽科、蓋蝽科、鞘喙蝽科和蚤蝽科。本研究支持涉水蝽科仍屬于蝎蝽下目，蚤蝽科屬于蚤蝽總科，蓋蝽科和潛蝽科屬于潛蝽總科，鞘喙蝽科與仰蝽科歸為仰蝽