
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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:從中藥功勞木提取物中篩選具有抗腫瘤作用的活性成分,并探討活性成分的抗腫瘤作用機(jī)制。
方法:采用MTT(3-(4,5-Dimethythiazol-2-y1)-2,5-diphenyl-te-trazoliumbromide)法檢測(cè)功勞木提取物對(duì)人白血病K562細(xì)胞的增殖抑制作用,篩選抗腫瘤活性成分。通過吖啶橙/溴乙啶(Acridine orange/Ethidium BromideAO/EB)雙染法觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化
2、,羅丹明123(Rhodamine,Rh123)/Hoechst33342檢測(cè)細(xì)胞線粒體膜電位的變化,采用DCFH-DA/Hoechst33342熒光法結(jié)合高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)氧自由基水平,以檢測(cè)功勞木活性成分K562細(xì)胞凋亡的影響。提取兔腦微管蛋白采用比濁發(fā)檢測(cè)功勞木活性成分對(duì)微管蛋白聚合-解聚的影響。
結(jié)果:從功勞木提取物中篩選出兩種抗腫瘤活性成分,分別為藥根堿和小檗堿,其對(duì)K562細(xì)胞作用48h的IC50分
3、別為30.47μg/ml,15.36μ/ml。藥根堿、小檗堿作用K562細(xì)胞36h后,在形態(tài)學(xué)上呈現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡特征,且細(xì)胞內(nèi)氧自由基水平明顯增加,細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位明顯降低,均呈濃度依賴性。體外兔腦微管蛋白聚合-解聚分析表明,藥根堿和小檗堿均能抑制微管蛋白的聚合,且藥根堿作用強(qiáng)于小檗堿。
結(jié)論:從功勞木中提取的藥根堿和小檗堿對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)具有明顯的增殖抑制作用并可誘導(dǎo)其凋亡。藥根堿和小檗堿可能通過阻礙線粒體內(nèi)信號(hào)傳
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