血液HCV篩查策略的探討.pdf

1、中國(guó)丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)感染人數(shù)約達(dá)4000萬(wàn),其中約50％攜帶病毒,為全球之最,輸血傳播仍是HCV感染的重要途徑之一。HCV血液篩查檢測(cè)是防控HCV輸血傳播的最顯現(xiàn)成效的手段之一。因此,分析獻(xiàn)血人群流行病學(xué)特點(diǎn)和實(shí)施有效的HCV血液篩查策略是保障血液安全的重要任務(wù)。
　　目前基于不同檢測(cè)目的且發(fā)展較為成熟的HCV篩查技術(shù)有很多。其中抗HCVELISA檢測(cè)方法是對(duì)HCV感染應(yīng)用于血液篩查中最主要、

2、最常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)方法,可有效阻斷輸血傳播HCV,但因HCV感染窗口期較長(zhǎng)可造成漏檢,而核酸檢測(cè)雖對(duì)窗口期標(biāo)本有顯著的檢測(cè)優(yōu)勢(shì),但檢測(cè)費(fèi)用昂貴、實(shí)驗(yàn)要求高,限制了其推廣使用?？乖贵w聯(lián)合試劑可同時(shí)檢測(cè)HCV抗體和抗原,具有較好的靈敏度和特異性[2],且具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)時(shí)間較短、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求不高、檢測(cè)費(fèi)用相對(duì)核酸檢測(cè)低,且與現(xiàn)行的HCV-AbEIA血液篩查系統(tǒng)相兼容等特點(diǎn)。本文通過(guò)分析比較HCV抗體試劑,抗原抗體聯(lián)合試劑與抗體試劑在血液篩查

3、中的應(yīng)用價(jià)值,意在探索一種經(jīng)濟(jì)有效的血液安全篩查策略。
　　第一部分為北京地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血人群HCV感染及流行病學(xué)調(diào)查,對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行常規(guī)抗HCVELISA檢測(cè)篩選,根據(jù)HCV5`-UTR的保守序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和巢式PCR擴(kuò)增,并對(duì)RNA陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行基因分型測(cè)序分析。本次調(diào)查中北京地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血人群抗HCV血清學(xué)陽(yáng)性率為0.35%,其中HCV核酸陽(yáng)性率為0.10%,85%以上是第一次獻(xiàn)血;北京地區(qū)的無(wú)償獻(xiàn)血人群中HCV感染的基因型分

4、布仍以1b和2a為主,分別為63.56%、20.15%;3a基因型4.65%,3a/3b混合基因型為6.98%,3b基因型為0.78%,6a/1b混合型占3.88%。3b基因型的存在提示注射吸毒人群這一高危人群已經(jīng)成為輸血傳播風(fēng)險(xiǎn)的危險(xiǎn)來(lái)源之一,提示需要進(jìn)一步流行病學(xué)的調(diào)查明確獻(xiàn)血人群特點(diǎn);6a基因型提示現(xiàn)在基因型分布的南北差異越來(lái)越小,這可能與近年來(lái)北京流動(dòng)人口比例大幅增加有關(guān)。
　　第二部分為抗HCV-ELISA檢測(cè)方法在血液

5、篩查中的應(yīng)用,采用Ortho、WT和Murex三種抗HCV-ELISA試劑對(duì)987份血液篩查中HCV抗體初篩陽(yáng)性和灰區(qū)標(biāo)本進(jìn)行平行檢測(cè),并進(jìn)行了RIBA檢測(cè)和RNA檢測(cè)等補(bǔ)充實(shí)驗(yàn),分析抗體試劑檢測(cè)結(jié)果的ROC曲線,兩兩比較3種試劑的檢測(cè)結(jié)果符合性及檢出情況。Ortho、Murex在對(duì)陽(yáng)性確認(rèn)標(biāo)本的檢出中有較好的檢出率,WT相對(duì)進(jìn)口試劑的檢出率較低。除NS4片段外,進(jìn)口試劑和國(guó)產(chǎn)試劑對(duì)C、NS3、NS5片段檢測(cè)結(jié)果的差異均有顯著性,尤其是

6、NS3片段,血站可根據(jù)不同抗-HCV試劑對(duì)HCV不同區(qū)段抗體的檢出特性合理選擇初復(fù)檢試劑。ROC曲線分析結(jié)果顯示:單試劑檢測(cè)確認(rèn)標(biāo)本約登指數(shù)(平均值:0.66)要顯著低于兩種不同試劑組合檢測(cè)(平均值:0.90),雙試劑對(duì)HCV的檢出要高于單試劑,單試劑檢測(cè)存在漏檢。漏檢標(biāo)本中42例為RNA+/RIBA-或RNA+/RIBAIND,提示血清陽(yáng)轉(zhuǎn)前窗口期或HCV低滴度為ELISA漏檢的重要因素之一。
　　第三部分為第四代MurexHC

7、VAg/Ab聯(lián)合檢測(cè)試劑及HCVEIA抗體試劑聯(lián)合檢測(cè)在血液篩查中的應(yīng)用。采用MurexHCVAg/Ab聯(lián)合檢測(cè)試劑與MurexHCVAb檢測(cè)試劑,對(duì)987份血液篩查中HCV抗體初篩陽(yáng)性和灰區(qū)標(biāo)本,以及1份確認(rèn)窗口期標(biāo)本進(jìn)行比較檢測(cè),用RIBA、病毒核酸檢測(cè)試劑進(jìn)行補(bǔ)充驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),用陽(yáng)性檢出率、陰性檢出率和總檢出率,陽(yáng)性符合率、陰性符合率和總符合率對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;并進(jìn)一步將MurexHCVAg/Ab聯(lián)合檢測(cè)試劑分別與初篩試劑(ORT

8、HO、WT)組合,分析ROC曲線,比較抗原抗體試劑和抗體試劑聯(lián)合檢測(cè)的漏檢率和假陽(yáng)性率,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且其約登指數(shù)(0.92)略高于抗體試劑的組合(0.90);其中,MurexHCVAg/Ab和MurexHCVAb兩種試劑檢出不一致的標(biāo)本共有123份,其中5例RIBA-/RNA+標(biāo)本(包括確認(rèn)窗口期標(biāo)本),MurexHCVAg/Ab檢出4例,MurexHCVAb試劑檢出1例;15例RIBA+/RNA-標(biāo)本,MurexHCVAg/Ab檢

9、出5例,MurexHCVAb試劑檢出10例。MurexHCVAg/Ab聯(lián)合檢測(cè)試劑對(duì)HCVRIBA-/RNA+標(biāo)本有較好的檢出,與已在血液篩查中廣泛應(yīng)用的MurexHCVAb試劑相比符合率不高;無(wú)論MurexHCVAg/Ab聯(lián)合檢測(cè)試劑還是Murex/Ortho/WTHCVAb試劑,均存在抗體檢測(cè)的漏檢可能。聯(lián)合使用不同的酶免HCV試劑進(jìn)行血液HCV兩遍檢測(cè),尤其是采用HCVAg/Ab聯(lián)合檢測(cè)試劑與抗體試劑組合應(yīng)用,可以最大限度的防止經(jīng)