兒茶素對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的茶樹遺傳轉(zhuǎn)化的影響.pdf

1、I摘要本研究證明茶樹難以被農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化與茶樹的一些特定的化合物有關(guān)。茶樹含有豐富的次生代謝物質(zhì)。由于其含有不同種類的、豐富的黃酮類化合物，常被用來(lái)研究植物類黃酮代謝。茶樹這些有益特點(diǎn)的遺傳改良和生物研究需要一個(gè)簡(jiǎn)單有效而且低成本的方法。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化已經(jīng)被作為一種常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室方法來(lái)進(jìn)行植物的遺傳工程和生物研究。然而，茶樹難以被農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化，相關(guān)機(jī)理知之甚少。盡管一些報(bào)道已經(jīng)得到轉(zhuǎn)基因茶樹和毛發(fā)根，但目前還沒有建立一套高效的茶樹轉(zhuǎn)基因體

2、系。先前的研究已經(jīng)表明，茶多酚有明顯的抑菌活性，所以茶多酚可能會(huì)影響農(nóng)桿菌的生理活性和植物轉(zhuǎn)化的效率。本研究中，LB液體培養(yǎng)基提取的茶樹葉片及愈傷組織內(nèi)含物被用來(lái)檢測(cè)對(duì)農(nóng)桿菌及其轉(zhuǎn)化煙草的影響。高效液相色譜法（HPLC）檢測(cè)了茶樹葉片及愈傷組織提取液中的主要次生代謝物質(zhì)，并將這些物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品按照檢測(cè)的含量加入到培養(yǎng)基中檢測(cè)對(duì)農(nóng)桿菌的影響。與生長(zhǎng)在LB培養(yǎng)基中的對(duì)照組相比，農(nóng)桿菌在含有茶樹葉片次生代謝物質(zhì)（6.5mgml兒茶素）的培養(yǎng)基中

3、生長(zhǎng)受到抑制，六個(gè)致病基因表達(dá)也受到了不同程度抑制（36%73%），而且被侵染的煙草外植體出現(xiàn)褐化，沒有外源基因的瞬時(shí)和穩(wěn)定表達(dá)。茶愈傷組織提取液含有0.22mgmL兒茶素，對(duì)農(nóng)桿菌生長(zhǎng)和煙草轉(zhuǎn)基因毛發(fā)根的產(chǎn)生沒有顯著影響，然而大部分致病基因表達(dá)增強(qiáng)。LB培養(yǎng)基中添加兒茶素混合物標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)農(nóng)桿菌生長(zhǎng)、致病基因表達(dá)和煙草的轉(zhuǎn)化有明顯抑制作用，而LB培養(yǎng)基添加咖啡堿對(duì)農(nóng)桿菌沒有明顯影響。上述結(jié)果表明兒茶素是茶葉中影響農(nóng)桿菌的主要次生代謝物質(zhì)