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1、該論文工作的目的就是:1)確證6A8蛋白質(zhì)為一種α-甘露糖苷酶;2)6A8蛋白質(zhì)在細(xì)胞中的定位,檢測(cè)它是否也表達(dá)于胞膜,是一種胞膜酶.為了確證6A8蛋白質(zhì)的α-甘露糖苷酶本質(zhì),作者采用分子克隆重組技術(shù)將該室克隆到的3個(gè)6A8 cDNA片段連成一個(gè)完整的3300bp cDNA,經(jīng)測(cè)序完全正確,再將它插入真核表達(dá)載體pCDNA3中,在COS-7細(xì)胞中獲得瞬時(shí)表達(dá).以野生型及轉(zhuǎn)染空載體的COS-7細(xì)胞作對(duì)照.觀察到轉(zhuǎn)染6A8 cDNA-pCD
2、NA3的COS-7細(xì)胞蛋白勻漿上清液對(duì)p-nitrophenyl-α-D-mannopyranoside的酶解作用增強(qiáng),且不被swainsonine抑制.用單抗6A8作探針行Western Blotting,見(jiàn)分子量為120KDa的蛋白帶,轉(zhuǎn)染6A8 cDNA的細(xì)胞的Western blotting信號(hào)明顯增強(qiáng).120KDa蛋白與6A8 cDNA推測(cè)的編碼蛋白質(zhì)的分子量相當(dāng).這表明6A8 cDNA編碼的蛋白質(zhì)的確是一種α-甘露糖苷酶,可
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