Tnfr基因敲除小鼠Mdr和Mrp2表達對腸外營養(yǎng)肝損害的影響.pdf

1、目的：
　　探討TNF-α是否通過調(diào)控Mdr和/或Mrp2進而導致肝臟膽汁淤積;并通過抗TNF-α單克隆抗體干預實驗和Tnfr-/-小鼠PNAC模型，研究其能否通過調(diào)控上述基因表達防止PN相關肝損害。
　　方法：
　　將雄性6-8周齡C57BL/6J野生型小鼠30只隨機分為3組:TPN+mAb(抗TNF-α單克隆抗體)組、PN1組和對照1組（對照組），每組10只;將雄性6-8周齡Tnfr-/-小鼠20只隨機分為PN2組

2、和對照2組（對照組）。小鼠麻醉后行頸靜脈插管，使用自制旋轉輸液裝置，微泵持續(xù)24小時輸注營養(yǎng)液或生理鹽水。7天后過量麻醉處死，取血樣和肝組織標本。進行血清肝功能指標分析、TNF-α及其受體TNFR濃度測定;肝組織病理檢查、肝組織樣本TNF-α及其受體Tnfr、Mdr1、Mdr2與Mrp2mRNA和蛋白表達檢測。
　　實驗研究分為以下三個部分:
　　1.TPN所致肝損害小鼠模型建立，作為整個研究的基礎。
　　2.抗TNF

3、-α單克隆抗體防治小鼠PN相關肝損害的實驗研究，應用TNF-α抗體驗證TNF-α在PN相關肝損害發(fā)病機制中的作用。
　　3.TnfrⅠ基因敲除小鼠PN治療后的肝Mdr1、Mdr2和Mrp2表達及意義，從而探討TnfrⅠ基因缺失對PN相關肝損害的保護意義。
　　結果：
　　野生型小鼠PN1組的血清轉氨酶(ALT，AST)、直接膽紅素(Dbi1)和膽汁酸(BA)水平明顯高于對照組，提示存在PNAC早期病變，且小鼠肝Mdr1

4、、Mdr2與Mrp2表達下降。加用抗TNF-α單克隆抗體的PN組小鼠血清指標更接近正常，小鼠肝Mdr1、Mdr2與Mrp2表達上升，同時TnfrⅠ基因表達增強。Tnfr-/-小鼠經(jīng)腸外營養(yǎng)7天后，沒有出現(xiàn)PNAC病理和生化改變，也沒有顯著的肝Mdr1、Mdr2與Mrp2表達改變。
　　1.TPN所致肝損害小鼠模型建立:
　　TPN組的ALT、AST、Dbi1和BA水平顯著高于對照組(P＜0.05)，病理學檢查顯示TPN組出現(xiàn)

5、肝細胞變性壞死、膽汁淤積，但兩組間病理評分無統(tǒng)計學差異。
　　2.抗TNF-α單克隆抗體防治小鼠PN相關肝損害的實驗研究:PN1組小鼠的ALT、AST、Dbi1和BA水平顯著高于對照組(P＜0.05)，提示存在膽汁淤積早期改變;而抗TNF-α單克隆抗體（英夫利昔）的應用可改善PN小鼠血清Dbi1和白蛋白(ALB)水平，兩組指標的差異有顯著性(P＜0.05)，此外，TPN+mAb組小鼠血清ALT和BA也低于PN組小鼠，但差異不顯著。

6、同時，PN1組小鼠肝組織Mdr1、Mdr2和Mrp2mRNA表達明顯低于對照組(P＜0.05)，而TPN+mAb組小鼠肝組織Mdr1、Mdr2和Mrp2mRNA表達較PN1組有改善，兩組之間的差異有顯著性(P＜0.05)。
　　3.TnfrⅠ基因敲除小鼠PN應用的肝Mdr1、Mdr2和Mrp2表達及意義:Tnfr-/-小鼠PN組的肝大體形態(tài)基本正常，無肝細胞變性壞死及膽汁淤積;血清ALT、ALB、Tbi1、Dbi1和BA水平，肝M

7、dr1、Mdr2、Mrp2mRNA表達，以及肝TNF-α基因和蛋白表達與同質(zhì)對照組小鼠無顯著差異(P＞0.05)。PN2組（Tnfr-/-）小鼠與PN1組（野生型）比較，PN2組小鼠血清ALT和BA明顯低于PN1組，而ALB濃度明顯高于PN1組;PN2組小鼠肝Mdr2、Mrp2mRNA表達略高于PN1組。
　　結論：
　　野生型PN小鼠肝組織Mdr1、Mdr2與Mrp2表達發(fā)生變化，這有助于研究PN相關肝損傷的分子機制。而這

8、種變化在Tnfr-/-小鼠中則不明顯，提示TNF-α及其受體可能通過調(diào)控肝Mdr1、Mdr2與Mrp2的表達對PNALD的發(fā)病產(chǎn)生影響。而抗TNF-α單克隆抗體（英夫利昔）在防治PNALD方面有應用前景，在投入臨床并推廣前，尚需擴大觀察樣本量，進一步證實安全性和適用時機。
　　1.小鼠TPN組與常見于嬰幼兒的PNAC早期血清學檢查結果相似，從而為PNALD分子水平研究確立動物模型載體。
　　2.抗TNF-α單克隆抗體（英夫利