組織工程化骨骼肌種子細(xì)胞存活率的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、種子細(xì)胞是組織工程研究的一個(gè)重要組成部分，種子細(xì)胞的獲得非常重要，成肌細(xì)胞可以從骨骼肌培養(yǎng)、純化而來(lái)，也可以誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞而獲得。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較兩種不同組織來(lái)源培養(yǎng)的骨骼肌成肌細(xì)胞的存活率，希望為組織工程化骨骼肌種子細(xì)胞的選擇提供參考依據(jù)，為種子細(xì)胞的培養(yǎng)提供一種更優(yōu)化的方法。 方法：采用胰蛋白酶消化法對(duì)出生1天內(nèi)的SD雄性大鼠乳鼠成肌細(xì)胞的體外原代培養(yǎng)、純化，傳代與鑒定，取第3代成肌細(xì)胞，常規(guī)制成細(xì)胞懸液，以1×10<'

2、5>/ml的細(xì)胞密度接種到24孔板和96孔板。每1，3，5，7，9d分別從24孔板中隨機(jī)取出5個(gè)孔和從96孔板中隨機(jī)取出10個(gè)孔的細(xì)胞，將取出的5孔細(xì)胞置于細(xì)胞活力分析儀進(jìn)行細(xì)胞存活率的測(cè)定。同時(shí)將10孔的細(xì)胞行MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)活力，測(cè)1，3，5，7，9d的OD值。用細(xì)胞存活率的平均值和OD值繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，了解細(xì)胞生長(zhǎng)情況。 體外原代培養(yǎng)4周齡SD雄性大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)，當(dāng)傳至第2代時(shí)，以含5-AzalO

3、μmol/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基行誘導(dǎo)培養(yǎng)。誘導(dǎo)14天后，取傳代至第3代的成肌細(xì)胞，常規(guī)制成細(xì)胞懸液，以1×10<'5>/ml的細(xì)胞密度接種到24孔板和96孔板。每1，3，5，7，9d分別從24孔板中隨機(jī)取出5個(gè)孔和從96孔板中隨機(jī)取出10個(gè)孔的細(xì)胞，將取出的5孔細(xì)胞置于細(xì)胞活力分析儀進(jìn)行細(xì)胞存活率的測(cè)定。同時(shí)將10孔的細(xì)胞行MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)活力，測(cè)1，3，5，7，9d的OD值。用細(xì)胞存活率的平均值和OD值繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，了解細(xì)胞生長(zhǎng)情況

4、。 結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)所用的兩種培養(yǎng)成肌細(xì)胞的方法均能達(dá)到5×10<'5>-7×10<'6>/ml的密度，ld-3d和5d-7d進(jìn)入倍增期，3d-5d進(jìn)入平臺(tái)期，第7d達(dá)到高峰，7d-9d為衰減期，后很快死亡。從骨骼肌中培養(yǎng)的成肌細(xì)胞，MTT法7d的oD值最高為0.8153，細(xì)胞活力分析儀測(cè)定的細(xì)胞存活率7d時(shí)也最高為92.06[％]，成肌細(xì)胞的平均直徑為9.07μm，最大為9.87μm，最小為8.26μm：采用骨髓問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)后

5、經(jīng)5-Aza誘導(dǎo)所得到的成肌細(xì)胞，MTT法7d的OD值最高為0.6358，細(xì)胞活力分析儀測(cè)定的細(xì)胞存活率7d時(shí)也最高為67.77[％]，成肌細(xì)胞的平均直徑為9.17μm，最大為10.27μm，最小為7.97μm。結(jié)論：從骨骼肌中培養(yǎng)的成肌細(xì)胞的存活率明顯高于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)后經(jīng)5_hza誘導(dǎo)所得到的成肌細(xì)胞存活率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(p<0．05)，證明直接從骨骼肌來(lái)源的成肌細(xì)胞更適合作為組織工程化骨骼肌的種子細(xì)胞來(lái)源。而兩種不同組織來(lái)