新型組織工程皮膚種子細(xì)胞—毛囊干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文新型組織工程皮膚種子細(xì)胞—毛囊干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究姓名：華云旗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：李秀蘭20070501天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文(天津市科委重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目03380291l，003112211)性的干預(yù)作用。通過(guò)FSC形態(tài)學(xué)的改變，研究真皮來(lái)源的FB對(duì)FSC多分化潛能的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1兩種分離方法比較顯示：“兩步酶”法可以獲取大量Bl整合素、CKl9表達(dá)陽(yáng)性具有高增殖活性的FSC；2

2、傳代FSC接種24h后含10％胎牛血清(FetalBovineSerumFBS)的KSFM培養(yǎng)環(huán)境中細(xì)胞幾乎全部貼壁；無(wú)血清的肛SFM中細(xì)胞未完全貼壁；MEM中細(xì)胞貼壁率最低且細(xì)胞均呈圓形，少數(shù)貼壁細(xì)胞的折光差。不同濃度FBS培養(yǎng)環(huán)境對(duì)FSC增殖影響結(jié)果顯示：不同血清濃度各組問(wèn)方差分析比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO05)，F(xiàn)SC適宜培養(yǎng)環(huán)境為含10％胎牛血清的KSFM的培養(yǎng)環(huán)境。3FSc體外生長(zhǎng)曲線顯示：細(xì)胞3天后開始迅速增殖，一周后進(jìn)入

3、緩慢增殖期，隨后進(jìn)入長(zhǎng)達(dá)30天的生長(zhǎng)平臺(tái)期。且發(fā)現(xiàn)在長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞與細(xì)胞之間無(wú)明顯的接觸性抑制現(xiàn)象，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期結(jié)果顯示：傳代后的FSC處于增殖的G1期細(xì)胞占為736％，G1期細(xì)胞變異指數(shù)cv為39，獲取的細(xì)胞均一性好。4“兩步酶”分離法同樣可以從人頭皮組織中獲取大量CKl9、B1整合索表達(dá)陽(yáng)性的FSC；5與ESC生長(zhǎng)曲線相比，F(xiàn)SC具有更高的增殖活性且有一個(gè)相對(duì)較長(zhǎng)保持高增殖活性的生長(zhǎng)期。ESC中只有部分細(xì)胞表達(dá)131整

4、合素，F(xiàn)SC均表達(dá)Bl整合素，細(xì)胞陽(yáng)性率幾乎100％；6FB與FSC共培養(yǎng)后細(xì)胞外LDH檢測(cè)結(jié)果顯示：共培養(yǎng)的FSC增殖活性增強(qiáng)，單純毛囊干細(xì)胞與共培養(yǎng)比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示：差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P(O05)。共培養(yǎng)后的FSC形態(tài)由短棒樣梭形細(xì)胞變?yōu)楸砥蛹?xì)胞形態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論：1“兩步酶”法是一種高效、快速獲取CKl9、B1整合素陽(yáng)性表達(dá)的FSC的分離方法。2獲取的FSC具有高增殖能力，細(xì)胞均一且能夠長(zhǎng)期在體外擴(kuò)增形成復(fù)層結(jié)構(gòu)。3血清提高加強(qiáng)