應(yīng)用人角質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程皮膚的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、皮膚是人體最大的器官,是機(jī)體與外界環(huán)境接觸的屏障.由于皮膚是外露的,它容易受到各種外界因素所致的損傷,如燒傷、創(chuàng)傷等.對于各種因素導(dǎo)致的皮膚創(chuàng)傷的修復(fù),是燒傷整形醫(yī)生經(jīng)常面臨的臨床難題,因?yàn)楹茈y獲得能滿足臨床要求的足夠皮源.應(yīng)用組織工程原理構(gòu)建的皮膚,是較為理想的皮膚替代物.將角質(zhì)干細(xì)胞(包括表皮干細(xì)胞和毛囊干細(xì)胞)用于組織工程皮膚的構(gòu)建,不僅可提供新的種子細(xì)胞,而且提供了組織工程皮膚在創(chuàng)面上長期存留的可能性.目的:體外分離培養(yǎng)表皮的角

2、質(zhì)干細(xì)胞(keratinocyte stem cell,KSC),并進(jìn)行鑒定.探索KSC在兩種不同培養(yǎng)體系中的生長增殖情況,選用有利于生長增殖的條件進(jìn)行KSC的體外培養(yǎng)與擴(kuò)增,用于構(gòu)建組織工程復(fù)合皮膚,修復(fù)裸鼠的全層皮膚缺損.經(jīng)過長達(dá)八個月的隨訪,觀察修復(fù)的效果,并與未經(jīng)分選的角質(zhì)形成細(xì)胞(keratinocytes,KC)構(gòu)建的組織工程復(fù)合皮膚之修復(fù)結(jié)果進(jìn)行比較.為了尋找新的皮膚種子細(xì)胞,我們還對毛囊來源的KSC進(jìn)行了分離與鑒定的初步

3、研究.結(jié)論:1.Ⅳ型膠原差速粘附法是一種分選表皮干細(xì)胞的有效方法.2.體外培養(yǎng)和擴(kuò)增KSC時,使用人成纖維細(xì)胞制備的飼養(yǎng)層和含胎牛血清的培養(yǎng)基,較無飼養(yǎng)層、無血清的培養(yǎng)條件,更有利于KSC的擴(kuò)增及其表型的維持.3.Ⅳ型膠原差速粘附法結(jié)合有飼養(yǎng)層和血清的培養(yǎng)系統(tǒng),可得到較高的克隆形成率(接近90％).4.KSC構(gòu)建的組織工程復(fù)合皮膚,較KC構(gòu)建的組織工程復(fù)合皮膚替代物,用于修復(fù)裸鼠全層皮膚缺損時,在創(chuàng)面停留時間長,創(chuàng)面回縮率低.5.采用組