組織工程室內(nèi)脂肪組織存活及生長(zhǎng)的研究.pdf

1、脂肪移植在整形外科有廣闊的應(yīng)用范圍。組織工程室的應(yīng)用為組織工程提供了另外一條可行的途徑。本課題擬研究帶蒂脂肪瓣以及游離移植的脂肪在組織工程室內(nèi)的存活及誘導(dǎo)自身脂肪組織從頭合成，為更好的促進(jìn)移植脂肪的存活和進(jìn)一步闡明脂肪從頭合成的機(jī)制。
　　帶蒂脂肪瓣移植因?yàn)槠湟浦埠髴?yīng)用顯微外科技術(shù)即刻重建脂肪內(nèi)部的血液循環(huán)，移植后體積縮小少，能取得移植的最佳效果。但帶蒂脂肪供區(qū)有限，切取大量脂肪后易導(dǎo)致供區(qū)繼發(fā)畸形，這限制了帶蒂脂肪瓣移植在臨床的

2、應(yīng)用。游離脂肪移植因手術(shù)操作簡(jiǎn)單，加之脂肪抽吸技術(shù)的廣泛開(kāi)展，使得游離移植脂肪在臨床上更加普及。但是游離移植脂肪后脂肪體積的縮小可高達(dá)70％，因其不可預(yù)見(jiàn)性以及高吸收率，也限制了其在臨床的應(yīng)用。
　　在體內(nèi)應(yīng)用生物惰性材料制作而成的組織工程室能為擬構(gòu)建的組織提供一個(gè)良好的生長(zhǎng)空間，如果把在體血管也轉(zhuǎn)移入組織工程室，在體血管可通過(guò)出芽生長(zhǎng)的方式逐漸擴(kuò)展固有血管網(wǎng)絡(luò)，為室內(nèi)生長(zhǎng)的組織提供血管化的基礎(chǔ)及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。表面帶孔的組織能更好的促

3、進(jìn)室內(nèi)組織的生長(zhǎng)，可能加大了室內(nèi)外營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的交流。組織工程室在體內(nèi)構(gòu)建出的相對(duì)獨(dú)立的空間有利于研究特定組織的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。
　　本課題擬在兔體內(nèi)利用帶蒂脂肪瓣，外覆以硅膠制作的組織工程室，構(gòu)建出更大體積的脂肪瓣，使得脂肪瓣向皮膚一樣經(jīng)擴(kuò)張器擴(kuò)張后由小變大，繼而移植后減輕供區(qū)繼發(fā)畸形，并提供更多的脂肪組織來(lái)修復(fù)缺損以獲得滿意的外形。表面帶孔的組織工程室內(nèi)可積聚大量的組織滲液，我們同時(shí)擬觀察這些組織液能否支撐自體脂肪的存活及生長(zhǎng)，并對(duì)

4、組織工程室內(nèi)組織滲液進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢測(cè)、生化檢測(cè)、生長(zhǎng)因子含量檢測(cè)以及以及探討異種脂肪移植到組織工程室內(nèi)部分存活及誘導(dǎo)兔自身脂肪從頭合成的機(jī)制。
　　1.組織工程室內(nèi)帶蒂脂肪瓣自發(fā)生長(zhǎng)的研究
　　目的：初步探索組織工程室在兔體內(nèi)脂肪組織工程中的應(yīng)用；建立研究兔體內(nèi)脂肪組織自發(fā)生長(zhǎng)的動(dòng)物模型。方法：制作中空的表面帶孔的硅膠組織工程室；將兔體內(nèi)以腹壁下淺動(dòng)脈為蒂的脂肪瓣轉(zhuǎn)移至中空的硅膠組織工程室后6周取材。結(jié)果：硅膠組織工程室能很好

5、的支持室內(nèi)脂肪瓣的生長(zhǎng)；所有組織工程室內(nèi)內(nèi)容物體積增大，脂肪瓣外面形成一層結(jié)締組織構(gòu)成的包膜，包膜穿過(guò)組織工程室表面的孔與室外包膜交通。室內(nèi)內(nèi)容物體積從0.5225±0.031ml增加到3.7625±0.106ml，包膜體積大小為0.7525±0.04ml，脂肪瓣的體積從0.5225±0.031ml增加到3.01±0.135ml,增加了476％。結(jié)論：硅膠制作的組織工程室能應(yīng)用到體內(nèi)脂肪組織工程，且為室內(nèi)組織提供空間生長(zhǎng)；成功構(gòu)建了兔體

6、內(nèi)組織工程室內(nèi)脂肪組織自發(fā)生長(zhǎng)的模型，帶蒂的脂肪組織可以在不添加任何細(xì)胞，生長(zhǎng)因子的情況下自發(fā)生長(zhǎng)。
　　2.兔自體顆粒脂肪在組織工程室內(nèi)存活的研究
　　目的：觀察組織工程室在沒(méi)有在體血管通過(guò)時(shí)單單依靠滲到室內(nèi)的組織液能否支持游離移植的顆粒脂肪組織的存活。方法：兔自體脂肪切取后制備成1-3mm3的顆粒狀，對(duì)照組即刻移植到兔背部皮下、實(shí)驗(yàn)組1即刻移植到兔背部組織工程室，實(shí)驗(yàn)組2埋置組織工程室到兔體內(nèi)20后，再移植兔自體顆粒脂肪

7、。3個(gè)月后取材。結(jié)果：所有移植的脂肪的體積均有縮小，所有實(shí)驗(yàn)組的組織工程室內(nèi)均有部分脂肪存活。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組1脂肪組織存活體積無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異，對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2相比，脂肪組織的體積有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。討論：組織工程室內(nèi)的滲液能夠支持移植脂肪的部分存活，延遲移植脂肪到組織工程室能提高移植脂肪的存活率。組織工程室可以再不添加任何生長(zhǎng)因子、支架材料、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的前提下支持高代謝率的脂肪組織的部分存活。
　　3.組織工程室內(nèi)組織滲液的研

8、究
　　目的：觀察兩種表面孔徑不同的組織工程室內(nèi)組織滲液體積的動(dòng)態(tài)變化，繪制時(shí)間-體積曲線，并對(duì)滲液做細(xì)胞學(xué)檢測(cè)；檢測(cè)室內(nèi)組織滲液總蛋白、白蛋白、糖的含量并與血清做對(duì)比；用Westernblot初步檢測(cè)組織工程室內(nèi)滲液是否含有轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-β。方法：在兔體內(nèi)埋置組織工程室后，特定時(shí)間抽取組織工程室內(nèi)滲出液測(cè)量體積，抽取組織液后直接進(jìn)行臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)死細(xì)胞的數(shù)量；分別在7天、14天、21天抽取室內(nèi)組織滲出液進(jìn)行總蛋白、白蛋白和