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文檔簡介
1、目的:
研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(C)與非結構蛋白4B(NS4B)對HepG2細胞中Wnt1、β-catenin、c-myc及CyclinD1表達的影響,以探索HCV核心蛋白、NS4B與細胞增殖的關系及其可能的機制。
方法:
利用脂質(zhì)體介導將HCV1b型核心蛋白與NS4B的重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)C、pcDNA3.1(-) NS4B分別和共同瞬時轉染HepG2細胞,同時以轉染空載體pcDNA
2、3.1(-)和未轉染HepG2細胞作為對照。RT-PCR及Western Blot檢測轉染細胞中核心蛋白與NS4B mRNA及蛋白的表達;運用RT-PCR及Western Blot檢測各組細胞中Wnt1、β-catenin、c-myc及CyclinD1的表達水平;MTT法繪制細胞生長曲線,觀察核心蛋白與NS4B對HepG2細胞生長的影響;利用流式細胞術檢測細胞周期情況。
結果:
1.重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)C、
3、pcDNA3.1(-) NS4B分別和共同瞬時轉染HepG2細胞,成功表達HCV C、NS4B mRNA及蛋白。
2. pcDNA3.1(-)C組、pcDNA3.1(-)NS4B組、pcDNA3.1(-)C+pcDNA3.1(-) NS4B組的HepG2細胞中Wnt1、β-catenin、c-myc、CyclinD1 mRNA與蛋白的相對表達量均高于空白對照組和pcDNA3.1(-)組(p<0.01);pcDNA3.1(-)C
4、組、pcDNA3.1(-)NS4B組及pcDNA3.1(-)C+pcDNA3.1(-)NS4B組間兩兩比較無明顯差別(P>0.05);空白對照組與pcDNA3.1(-)組比較無明顯差別(P>0.05)。
3.轉染后1~4天,pcDNA3.1(-)C組、pcDNA3.1(-)NS4B組、pcDNA3.1(-)C+pcDNA3.1(-)NS4B組的HepG2細胞生長速度均快于pcDNA3.1(-)組與空白對照組(p<0.01),其
5、余組間的細胞生長速度相比較均無明顯差別(P>0.05)。
4. pcDNA3.1(-)C組、pcDNA3.1(-)NS4B組、pcDNA3.1(-)C+pcDNA3.1(-) NS4B組與空白對照組及pcDNA3.1(-)組相比,Go/GI期細胞減少,S期和G2/M期細胞增多(p<0.01),其余組間的Go/GI期,S期及G2/M期細胞分別相比較均無明顯差別(P>0.05)。
結論:
1. HCV核心蛋白與
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