基于1b型HCV不同準(zhǔn)種株核心蛋白對(duì)HepG2細(xì)胞的蛋白質(zhì)組影響的比較研究.pdf

1、目的：
　　 1．研究基因1b型不同準(zhǔn)種株丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白（CORE）對(duì)HepG2細(xì)胞的蛋白質(zhì)組影響；
　　 2．比較研究不同準(zhǔn)種株丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白（CORE）所影響的細(xì)胞蛋白組；
　　 3．篩選獲得在HCV基因1b型及其不同準(zhǔn)種株CORE致病及致癌機(jī)制中的重要目標(biāo)蛋白分子。
　　 方法：
　　 1．構(gòu)建三個(gè)不同準(zhǔn)種株截短型HCV CORE重組真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-N

2、1/CORE，分別為：T：1～172 aa(編碼N端1～172 aa)、NT:1～172aa(編碼N端1～172 aa)、C191（HCV-J，基因1b型）：1～172 aa(編碼N端1～172 aa)。T、NT分別代表含有癌中心株和癌旁株核心區(qū)基因序列（從一例由單純HCV感染導(dǎo)致的LC并發(fā)HCC病人的癌中心及癌旁組織中克隆獲得）的真核表達(dá)質(zhì)粒，經(jīng)序列分析，T、NT也屬于基因1b型；（已完成）
　　 2．脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染HepG2

3、細(xì)胞，Western blot驗(yàn)證細(xì)胞內(nèi)CORE的表達(dá)；
　　 3．提取細(xì)胞總蛋白，應(yīng)用固相化pH梯度雙向凝膠電泳(2DE)識(shí)別差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)獲得差異蛋白點(diǎn)的肽質(zhì)指紋圖譜，再通過SWISS-PROT數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質(zhì)；
　　 4．對(duì)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)的比較以及分子功能的驗(yàn)證。
　　 結(jié)果：
　　 1．不同準(zhǔn)種CORE真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)

4、胞獲得了表達(dá)；
　　 2．轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后不同準(zhǔn)種CORE其表達(dá)不同，熒光顯微鏡下觀察可見GFP-CORE的表達(dá)，RT-PCR檢測(cè)到mRNA的表達(dá)；
　　 3．分離并初步鑒定了9種與HCV感染相關(guān)的差異表達(dá)的蛋白質(zhì)；
　　 4．不同準(zhǔn)種CORE影響的細(xì)胞蛋白表達(dá)量不同。
　　 結(jié)論：
　　 1．成功構(gòu)建CORE真核表達(dá)質(zhì)粒并獲得表達(dá)，為進(jìn)一步細(xì)胞內(nèi)驗(yàn)證與CORE相互作用的蛋白質(zhì)研究奠定基礎(chǔ)；<