基于1b型HCV不同準種株核心蛋白對HepG2細胞的蛋白質(zhì)組影響的比較研究.pdf

1、目的：
　　 1．研究基因1b型不同準種株丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白（CORE）對HepG2細胞的蛋白質(zhì)組影響；
　　 2．比較研究不同準種株丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白（CORE）所影響的細胞蛋白組；
　　 3．篩選獲得在HCV基因1b型及其不同準種株CORE致病及致癌機制中的重要目標蛋白分子。
　　 方法：
　　 1．構(gòu)建三個不同準種株截短型HCV CORE重組真核表達質(zhì)粒pEGFP-N

2、1/CORE，分別為：T：1～172 aa(編碼N端1～172 aa)、NT:1～172aa(編碼N端1～172 aa)、C191（HCV-J，基因1b型）：1～172 aa(編碼N端1～172 aa)。T、NT分別代表含有癌中心株和癌旁株核心區(qū)基因序列（從一例由單純HCV感染導致的LC并發(fā)HCC病人的癌中心及癌旁組織中克隆獲得）的真核表達質(zhì)粒，經(jīng)序列分析，T、NT也屬于基因1b型；（已完成）
　　 2．脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染HepG2

3、細胞，Western blot驗證細胞內(nèi)CORE的表達；
　　 3．提取細胞總蛋白，應用固相化pH梯度雙向凝膠電泳(2DE)識別差異表達的蛋白質(zhì)，用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)獲得差異蛋白點的肽質(zhì)指紋圖譜，再通過SWISS-PROT數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質(zhì)；
　　 4．對差異表達的蛋白質(zhì)的比較以及分子功能的驗證。
　　 結(jié)果：
　　 1．不同準種CORE真核表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細

4、胞獲得了表達；
　　 2．轉(zhuǎn)染HepG2細胞后不同準種CORE其表達不同，熒光顯微鏡下觀察可見GFP-CORE的表達，RT-PCR檢測到mRNA的表達；
　　 3．分離并初步鑒定了9種與HCV感染相關(guān)的差異表達的蛋白質(zhì)；
　　 4．不同準種CORE影響的細胞蛋白表達量不同。
　　 結(jié)論：
　　 1．成功構(gòu)建CORE真核表達質(zhì)粒并獲得表達，為進一步細胞內(nèi)驗證與CORE相互作用的蛋白質(zhì)研究奠定基礎(chǔ)；<