HCV基因1b型不同準(zhǔn)種株截短型核心蛋白對Chang liver細(xì)胞生長的影響.pdf

1、目的: (1)研究基因1b型不同準(zhǔn)種株截短型丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(CORE)對Chang liver細(xì)胞生長的影響； (2)觀察不同準(zhǔn)種株截短型CORE在亞細(xì)胞器的分布； (3)建立穩(wěn)定表達(dá)不同準(zhǔn)種株截短型CORE的人肝細(xì)胞模型。 方法: (1)構(gòu)建三個(gè)不同準(zhǔn)種株截短型HCV CORE重組真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-Nl/CORE，分別為：T：1一172 aa(編碼N端1～172 aa)、N

2、T：1～172 aa(編碼N端1～172 aa)、C191(HCV-J，基因1b型)：1～172 aa(編碼N端1～172 aa)。T、NT。分別代表含有癌中心株和癌旁株核心區(qū)基因序列(從一例由單純HCV感染導(dǎo)致的LC并發(fā)HCC病人的癌中心及癌旁組織中克隆獲得)的真核表達(dá)質(zhì)粒，經(jīng)序列分析，T、NT也屬于基因1b型； (2)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染Chang liver細(xì)胞，獲得瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的Chang liver細(xì)胞； (3)流式細(xì)胞

3、儀檢測細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡率； (4)MTT法檢測細(xì)胞生長增殖狀態(tài)，并繪制細(xì)胞生長曲線； (5)激光共聚焦顯微鏡觀察GFP-CORE在亞細(xì)胞器的分布； (6)轉(zhuǎn)染48 h后用G418篩選一個(gè)月，熒光顯微鏡下觀察GFP-CORE的表達(dá)，RT-PCR檢測mRNA的表達(dá)。 結(jié)果: (1)三個(gè)不同準(zhǔn)種株截短型pEGFP-N1/CORE轉(zhuǎn)染Chang liver細(xì)胞的S期所占的百分比低于空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞(p<

4、0.05)，而G0/G1期所占的百分比高于空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞(p<0.05)，三個(gè)不同準(zhǔn)種株截短型pEGFP-N1/CORE轉(zhuǎn)染Chang liver細(xì)胞之間S期所占的百分比沒有顯著差異(P>0.05)； (2)三個(gè)不同準(zhǔn)種株截短型pEGFP-N1/CORE轉(zhuǎn)染Chang liver細(xì)胞的凋亡率高于空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，其中，T>NT>C191，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)： (3)三個(gè)不同準(zhǔn)種株截短型pEGFP-N1/COR

5、E轉(zhuǎn)染Chang liver細(xì)胞生長增殖率低于空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，T