乙型肝炎病毒HBsAg基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Chang-Liver肝細(xì)胞系差異表達(dá)蛋白的研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(HBV)感染是嚴(yán)重影響我國人民健康的重要傳染病?？梢鸺毙?、慢性肝炎、肝硬化，并與肝癌的發(fā)生有密切的關(guān)系。目前，對(duì)于具體的HBV致病(癌)機(jī)制尚不十分明確。其中，HBV DNA整合于肝細(xì)胞基因組被認(rèn)為是肝細(xì)胞損傷、HCC發(fā)生的主要機(jī)制之一。 HBV是一種嗜肝部分雙鏈DNA病毒，其基因組長約3.2kb，具有4個(gè)主要的開放讀碼框架(ORF)，分別命名為S、C、P、X區(qū)，HBsAg是由S區(qū)編碼的表面蛋白，其編碼區(qū)長度為6

2、81個(gè)核苷酸(nt)，有226個(gè)氨基酸(aa)。HBV表面抗原蛋白具有多種生物功能，并在部分整合型肝細(xì)胞內(nèi)大量表達(dá)。 為了解HBsAg整合入肝細(xì)胞基因組后，肝細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)表達(dá)譜變化，以進(jìn)一步了解其對(duì)肝細(xì)胞生長代謝的影響，本研究成功構(gòu)建了HBsAg的真核表達(dá)載體并建立穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的Chang Liver-HBsAg-EGFP細(xì)胞系及空質(zhì)粒對(duì)照的Chang Liver-EGFP細(xì)胞系，經(jīng)雙向凝膠電泳。應(yīng)用ImageMaster2

3、DPaltinum5.1軟件(Amersham)對(duì)膠圖進(jìn)行斑點(diǎn)檢測和匹配。選取差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，用MALDI-TOF-MS質(zhì)譜進(jìn)行分析，獲得肽質(zhì)量指紋圖譜(PMF)。然后通過Mascot搜索查詢和生物信息學(xué)分析，鑒定出9個(gè)數(shù)據(jù)可靠的差異表達(dá)蛋白質(zhì)分子，與對(duì)照組相比，其中6個(gè)為上調(diào)蛋白(Proteindisulfide-isomerase precursor、HSP70 class molecular chaperones、 stratifi

4、n、peroxiredoxin1、Peroxiredoxin5、guanylate-binding protein)，3個(gè)為下調(diào)蛋白(Transgelin-2、capping protein(actin filament)muscle Z-line、Porin31HM)。包括：抗氧化蛋白、分子伴侶，參與物質(zhì)代謝蛋白，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)蛋白質(zhì)，細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白等。由此提示我們：整合至細(xì)胞基因組的表面抗原基因及其表達(dá)蛋白對(duì)細(xì)胞的生長、代謝、正常生