人類乙型肝炎病毒相關(guān)肝細(xì)胞癌microRNA差異表達(dá)譜分析.pdf

1、分類號(hào)：R7357密紐：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位口爭業(yè)學(xué)竹目◎?qū)W枝代：1u062學(xué)呼：2010602847學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)又蚌醬科^垮Tl^NJIHMEOICALUNIVERSITY碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATloN論文題目：人類乙型肝炎病毒相關(guān)肝細(xì)胞癌microRNA差異表達(dá)譜分析TITLEAnalysisofmicroRNAexpressionprofilesinhumanhepatitisBvirusrelatedhep

2、atocellularcarcinoma一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：外科學(xué)普外論文作者：李建彪指導(dǎo)教師：杜智教授導(dǎo)師組成員；高英堂教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一三年五月大津醫(yī)科人學(xué)碩士學(xué)位論文中又捅要肝細(xì)胞肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是我國最常見的惡性腫瘤之一，其以發(fā)病隱匿、預(yù)后差、死亡率高為主要特征。HCC的早期診斷是影響患者預(yù)后的重要因素之一。目前，現(xiàn)有的檢測手段還不能有效的早期發(fā)現(xiàn)HCC，因此，找

3、到一種早期診斷HCC的標(biāo)志物就顯得十分重要了。研究發(fā)現(xiàn)，microRNA(miRNA)在肝癌組織中異常表達(dá)，它可能參與了肝細(xì)胞癌變及肝癌轉(zhuǎn)移的病理過程。HCC的發(fā)生發(fā)展與病毒性肝炎、肝硬化等慢性肝病有著密切的關(guān)系，探討miRNA在人類乙型肝炎病毒相關(guān)肝癌組織中的作用將有重要的意義。目的：現(xiàn)有研究表明，多種miRNA的差異表達(dá)與HCC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究擬通過對(duì)人類乙型肝炎病毒(HBV)相關(guān)HCC及其癌旁組織miRNA差異表達(dá)譜的研

4、究，篩選與HCC特異的miRNA。方法：選取11例HCC患者的癌組織及其相應(yīng)的癌旁組織，并提取各自的總RNA(包含miRNA)，將1l例癌組織和11例癌旁組織的總RNA分別混合在一起，作為各自反應(yīng)的模板。利用RT2miRNAPCRArray檢測88個(gè)人類癌相關(guān)miRNA在癌組織與癌旁組織中的表達(dá)差異譜，以二者相對(duì)表達(dá)量的倍數(shù)變化在2倍及其以上，表示miRNA在癌及癌旁組織有差異，以癌組織／癌旁組織計(jì)算，倍數(shù)三2表示高表達(dá)，倍數(shù)卯5表示低

5、表達(dá)。進(jìn)一步選取正常肝組織(5例)、慢性乙型肝炎組織(CHB)(5例)、HCC患者癌組織(12例)及其相應(yīng)的癌旁組織(12例)，分別提取各自的總RNA，然后采用TaqManqRTPCR法檢測let7a在各組織的表達(dá)量，并對(duì)篩選結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果：本研究所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次，綜合分析篩選實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在88個(gè)miRNA中，9個(gè)miRNA的擴(kuò)增曲線或溶解曲線質(zhì)量較差，予以剔除，則其余79個(gè)miRNA用于癌與癌旁組織問表達(dá)譜的分析。相對(duì)于癌旁組織，

6、在癌組織中高表達(dá)的miRNA有9個(gè)，分別為miR9、miR25、miR96、miR183、miR191、miR372、miR18a、miR196a、miR一301a，其中miR一96、miR183、miR一196a具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005)，分別較其癌旁組織升高4746、7127、3498倍；同時(shí)，9個(gè)miRNA在癌組織中低表達(dá)，分別為let7a、let一7b、let7c、1et7e、miR一100、miR138、miR214、miR一