醒腦靜注射液對大鼠腦損傷后細胞凋亡及相關蛋白表達的影響.pdf

1、目的： 創(chuàng)傷性顱腦損傷(traumaticbraininjuryTBI)是一種嚴重的腦組織損傷，有很高的致死率及致殘率。在腦損傷的致傷機制中，繼發(fā)性腦損傷占有很重要的角色，它的嚴重程度決定了患者的預后。大量實驗研究證實，細胞凋亡(apoptosis)是繼發(fā)性腦損傷重要的細胞死亡形式。醒腦靜注射液主要成分有麝香、冰片、梔子、郁金等，是一種中藥復方制劑，近年來，醒腦靜注射液逐漸開始用于顱腦外傷的治療，并取得了一定的療效。本試驗的目的

2、是觀察醒腦靜注射液對大鼠創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)后細胞凋亡及Bcl-2、Bax及Caspase-3表達的影響，探討醒腦靜對腦外傷后細胞凋亡的影響和可能機制，為臨床治療腦損傷提供理論依據(jù)。 方法： 普通級Wistar雄性大鼠108只，體重300-350g，由湖北省實驗動物中心提供。隨機將動物分為假手術組、損傷對照組和醒腦靜注射液治療組，每組36只，每組再分為傷后6h、12h、24h、48h、72h和168h6個亞組，每亞組6

3、只。假手術組僅行開顱術，另兩組采用改進的Feeney法制作大鼠TBI模型，醒腦靜注射液治療組在傷后10min內腹腔內注射醒腦靜注射液20ml/kg，每日一次至造模結束；損傷對照組則腹腔內注射等量的0.9％氯化鈉溶液。然后分別按各時間點將動物斷頭處死，立即取出全腦組織，置于4％的中性甲醛溶液中固定備用。組織切片為常規(guī)石蠟切片。應用末端脫氧核糖核酸轉移酶介導的生物素脫氧尿嘧啶核苷酸缺口末端標記法(terminal-deoxynucleoti

4、dyltransferasemediatedbiotin-dUTPnickendlabeling，TUNEL)檢測細胞凋亡，采用過氧化物酶標記的鏈霉卵白素(Streptavidin/Peroxidase，SP)法進行Bcl-2、Bax、caspase-3的免疫組織化學染色，檢測Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表達。在400高倍光學顯微鏡下觀察TUNEL及Bcl-2、Bax、caspase-3免疫反應的結果，計算每張標本隨機5

5、個視野的平均陽性細胞數(shù)。 結果： 免疫組化檢測見Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白陽性表達主要在胞漿和核膜著色，呈彌漫性或散在性棕黃色顆粒。Bcl-2蛋白表達在傷后6h下降，在損傷后72h表達值達到最低。而治療組Bcl-2蛋白表達下降在各個時間點無顯著變化，24h后兩組比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。Bax蛋白表達在傷后6h增強，48～72h達高峰，傷后7d明顯下降，治療組的蛋白表達較損傷組降低，72h以后兩組

6、比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。Caspase-3蛋白表達在傷后6小時可見，24h后表達增加，3d達高峰，治療組蛋白表達降低，1d后兩組比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。TUNEL陽性細胞表達在細胞核上，呈棕黃色顆粒，正常腦組織內有很少的TUNEL陽性細胞表達，傷后6小時表達開始增加，72小時達到高峰。治療組陽性細胞較損傷組減少，48h后兩組比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結論： 從研究中發(fā)現(xiàn)，醒腦靜注射液對凋亡具有抑制作用

7、，作用從損傷后24h開始，72h以后逐漸達到高峰。關于醒腦靜注射液防治腦損傷導致的腦神經(jīng)細胞凋亡的作用機制，分析認為與這種藥物具有顯著的清除自由基及拮抗細胞因子的作用有關。氧自由基與興奮性氨基酸在顱腦外傷后的過度釋放可導致神經(jīng)細胞鈣通道開放，細胞內鈣離子大量積聚，引起鈣超載，而氧自由基和鈣超載正是導致細胞凋亡的重要因素。因此本研究結果提示，醒腦靜注射液的神經(jīng)保護作用可能通過減少細胞凋亡及調整相關基因蛋白Bcl-2、Bax、Caspase