組織蛋白酶L、S、K、B及其抑制劑Cystatin C與大隱靜脈曲張發(fā)病機(jī)制關(guān)系的形態(tài)學(xué)研究.pdf

1、目的：①觀察曲張大隱靜脈(varicosegreatsaphenous，VGS)管壁的光鏡結(jié)構(gòu)和超微結(jié)構(gòu)的改變；②觀察曲張大隱靜脈管壁內(nèi)彈性纖維(elasticfiber，EF)及膠原纖維(collagenousfiber，CF)的分布及變化；③觀察曲張大隱靜脈中溶酶體半胱氨酸蛋白酶(cysteineprotease)中組織蛋白酶(cathepsin，Cat)L、S、K、B及其抑制劑CystatinC的表達(dá)變化；④探討CatL、CatS

2、、CatK、CatB及CystatinC與大隱靜脈曲張發(fā)病機(jī)制的關(guān)系。 方法：通過(guò)臨床術(shù)中收集曲張大隱靜脈31例，正常大隱靜脈23例。標(biāo)本獲取后制成超薄切片置透射電鏡(transmissionelectronmicroscrope，TEM)下觀察超微結(jié)構(gòu)變化；制成石蠟切片分別進(jìn)行HE染色、Weigert染色、免疫組織化學(xué)SABC方法染色，在光鏡下觀察一般組織學(xué)變化及CatL、CatS、CatK、CatB、CystatinC的表達(dá)

3、變化；同時(shí)進(jìn)行熒光免疫組織化學(xué)方法染色，觀察上述組織蛋白酶與靜脈壁細(xì)胞型的共定位：應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行定量分析，比較兩組大隱靜脈管壁中組織蛋白酶平均光密度值(meanopticaldensity，MOD)，用SPSS12.0軟件系統(tǒng)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 結(jié)果：①在HE染色切片中，正常大隱靜脈內(nèi)膜薄，腔面光滑平整；中膜內(nèi)有長(zhǎng)梭形平滑肌細(xì)胞(smoothmusclecell，SMC)，呈環(huán)形層狀排列：外膜較厚。曲張大隱

4、靜脈顯示內(nèi)腔直徑增大，內(nèi)膜增厚，部分內(nèi)皮細(xì)胞(endothelialcell，EC)不完整；中膜增厚，SMC形態(tài)異常，排列紊亂：外膜與正常大隱靜脈比較無(wú)明顯改變。②在Weigert染色切片中，正常大隱靜脈管壁內(nèi)EF呈連續(xù)的細(xì)絲波浪狀，中膜SMC與EF、CF相鄰呈多層環(huán)狀分布；外膜中豐富的CF與EF排列規(guī)則。曲張大隱靜脈管壁內(nèi)EF明顯減少，部分?jǐn)嗔?，排列紊亂，CF減少不甚明顯，外膜中CF與EF均失去環(huán)層狀外觀。③電鏡下，正常大隱靜脈內(nèi)膜表

5、面EC結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞間連接緊密；SMC呈梭形，胞漿內(nèi)富含大量肌絲；膠原原纖維分布于中膜和外膜，排列規(guī)則。曲張大隱靜脈內(nèi)膜增厚，可見(jiàn)皺襞，EC內(nèi)有大量小泡，表面呈微絨毛樣改變，細(xì)胞間連接不緊密，部分EC脫落：SMC形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂，胞漿中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體和線粒體豐富，肌絲少；膠原原纖維減少，排列紊亂，粗細(xì)不等。④免疫組化染色可見(jiàn)，正常大隱靜脈壁CatL、CatS及CatK免疫反應(yīng)為陰性，CatB為弱陽(yáng)性：曲張大隱靜脈壁上述組織蛋白酶

6、免疫反應(yīng)陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞主要定位于EC及SMC，分布于胞質(zhì)中，可見(jiàn)點(diǎn)、片狀棕褐色布滿細(xì)胞漿，細(xì)胞核為陰性。CystatinC在正常大隱靜脈中免疫反應(yīng)為陽(yáng)性，定位于EC、SMC的胞漿中，呈棕褐色細(xì)或粗顆粒狀：在曲張大隱靜脈中，未見(jiàn)明顯CystatinC免疫陽(yáng)性細(xì)胞。⑤熒光免疫組織化學(xué)染色可見(jiàn)，CatL、CatS、CatK、CatB(紅色)在曲張的大隱靜脈管壁EC和SMC(綠色)內(nèi)均有表達(dá)，CystatinC(紅色)主要表達(dá)于正常大隱靜脈管壁

7、EC和SMC(綠色)。由紅色與綠色疊和所得的橙色表明CatL、CatS、CatK、CatB及其抑制劑CystatinC與EC、SMC共定位。⑥圖像分析結(jié)果表明：與正常組大隱靜脈MOD值比較，曲張組大隱靜脈EC及SMC中CatL、CatS、CatK、CatB免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞MOD值明顯增高，CystatinC明顯降低，曲張組中各組織蛋白酶之間差異無(wú)顯著性，曲張組與正常組間各組織蛋白酶差異顯著(P＜0.01)。 結(jié)論：①大隱靜脈曲張