胰島素通過(guò)mTOR信號(hào)通路對(duì)鵝肝細(xì)胞體外增殖的調(diào)控研究.pdf

1、mTOR(the mammalian target ofrapamycin)是一種Ser/Thr蛋白激酶，其存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，并可以通過(guò)匯聚和整合細(xì)胞內(nèi)外的信號(hào)（生長(zhǎng)因子、營(yíng)養(yǎng)、能量等）進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖。mTOR信號(hào)通路可以影響胚胎干細(xì)胞以及早期胚胎的發(fā)育，并且與代謝紊亂以及腫瘤等疾病有關(guān)，胰島素可起到正向調(diào)控作用。本課題選擇鵝肝細(xì)胞為樣本，在正常鵝原代肝細(xì)胞和mTOR信號(hào)通路被雷帕霉素（rapamycin）抑制的肝細(xì)胞中加入

2、不同濃度的胰島素(0、50、100、150nmol/L)處理，檢測(cè)與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖相關(guān)的指標(biāo)，探討胰島素對(duì)mTOR信號(hào)通路的調(diào)控機(jī)理。
　　主要研究結(jié)果如下:
　　1用胰島素處理時(shí)，鵝肝細(xì)胞的DNA合成速率和細(xì)胞活性均隨著胰島素濃度的升高表現(xiàn)出上升趨勢(shì)，而且150nmol/L胰島素組的Brdu陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量比對(duì)照組增加了60％。同時(shí)，三種D型細(xì)胞周期蛋白（Cyclin D1，Cyclin D2,Cyclin D3的mRNA表達(dá)

3、量都隨著胰島素濃度的增加而逐漸升高(P＜0.05)，而細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控因子P21和P27的mRNA表達(dá)量均受到抑制。與對(duì)照組相比，三個(gè)處理的mTOR信號(hào)通路相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平都顯著增加(P＜0.05)，而且，S6K和P-S6K蛋白表達(dá)水平顯著增加（P＜0.05）。
　　2用雷帕霉素處理時(shí)，細(xì)胞周期蛋白D1的活性隨著其濃度的升高而顯著降低(P＜0.05)，同時(shí)p21的活性顯著增強(qiáng)。與對(duì)照組相比，雷帕霉素處理組中所有D型細(xì)胞周期蛋

4、白的mRNA表達(dá)水平明顯下降，相反，p21mRNA的表達(dá)水平明顯上升。另外，處理組中mTOR、4EBP1、S6K蛋白的活性顯著減?。≒＜0.05），而且mTOR、Rptor、4EBP1的mRNA表達(dá)水平顯著減少(P＜0.05)，S6K和P-S6K蛋白表達(dá)水平降低。
　　3用胰島素和30 nmol/L雷帕霉素共同處理時(shí)，細(xì)胞周期蛋白D1的活性比胰島素單處理的顯著降低，相反p21的活性顯著增強(qiáng)。另外，所有D型細(xì)胞周期蛋白的mRNA表達(dá)