體外轉(zhuǎn)染二甲基精氨酸二甲胺水解酶改善高膽固醇血癥兔胸主動(dòng)脈內(nèi)皮功能不全.pdf

1、研究背景和目的動(dòng)脈粥樣硬化是嚴(yán)重危害人類健康的一種慢性血管病變。一氧化氮介導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性血管舒張反應(yīng)降低是動(dòng)脈粥樣硬化的一個(gè)早期標(biāo)志。大量研究表明，內(nèi)源性一氧化氮合酶(NOS)抑制物—非對(duì)稱性二甲基精氨酸(ADMA)可能是導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能不全的重要物質(zhì)。而內(nèi)皮細(xì)胞中ADMA的主要代謝酶2型二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH2)表達(dá)和活性的降低與內(nèi)源性ADMA升高密切相關(guān)。但目前尚無(wú)直接增加DDAH2表達(dá)和活性的藥物。隨著分子生物學(xué)及基因

2、工程技術(shù)的飛速發(fā)展，基因治療成為防治動(dòng)脈粥樣硬化的一條頗有希望的新途徑。已有學(xué)者成功地將重組含內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)基因腺病毒轉(zhuǎn)染到動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物血管，但并不能完全改善內(nèi)皮依賴性血管舒張功能。因此本課題擬構(gòu)建重組DDAH2腺病毒載體，將其導(dǎo)入高脂飼養(yǎng)致動(dòng)脈粥樣硬化兔的離體胸主動(dòng)脈，探討DDAH2過(guò)表達(dá)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化內(nèi)皮功能不全的保護(hù)作用，為DDAH2基因治療動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病在臨床上的推廣應(yīng)用

3、提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法①采用分子克隆技術(shù)構(gòu)建hDDAH2重組穿梭載體和hDDAH2重組腺病毒載體，并在293細(xì)胞內(nèi)包裝、鑒定、擴(kuò)增，純化后獲得高滴度的病毒懸液；②用高脂、高膽固醇飼養(yǎng)家兔12w，制備動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型，并經(jīng)血脂測(cè)定、離體胸主動(dòng)脈環(huán)內(nèi)皮依賴性血管舒張功能檢測(cè)和病理切片鑒定模型制備成功；③用重組hDDAH2腺病毒(1.5×1010virus/ml)體外轉(zhuǎn)染高脂血癥動(dòng)物的胸主動(dòng)脈環(huán)和正常動(dòng)物的胸主動(dòng)脈環(huán)，并經(jīng)RT

4、-PCR證明轉(zhuǎn)染血管DDAH2表達(dá)增高，然后用離體血管環(huán)法檢測(cè)DDAH2過(guò)表達(dá)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化血管內(nèi)皮依賴性舒張功能損害的影響。 結(jié)論①本研究在國(guó)內(nèi)外首次成功構(gòu)建hDDAH2重組腺病毒載體，并證明腺病毒介導(dǎo)的hDDAH2基因能在血管壁中有效表達(dá)并具有生物學(xué)活性；②首次將hDDAH2重組腺病毒導(dǎo)入動(dòng)脈粥樣硬化家兔的離體血管，并能上調(diào)血管組織中DDAH2的表達(dá)和活性，逆轉(zhuǎn)血管的內(nèi)皮依賴性舒張功能不全；③本研究進(jìn)一步證實(shí)了DDAH2表達(dá)