二甲基精氨酸二甲胺水解酶1基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓易感性的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、原發(fā)性高血壓或高血壓病是由環(huán)境與遺傳因素共同作用所致的多基因疾病，個(gè)體間血壓的變異30～60％是由遺傳因素所決定的。血管內(nèi)皮在維持心血管系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)中起極其重要的作用，內(nèi)皮功能受損是包括高血壓病在內(nèi)的多種心血管疾病的早期表現(xiàn)。NO是維持血管內(nèi)皮功能最重要的一種介質(zhì)之一，由L-精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)的催化作用下生成。NO彌散進(jìn)入血管平滑肌細(xì)胞后，激活腺苷酸環(huán)化酶引起血管平滑肌松弛，血管舒張。非對(duì)稱二甲基精氨酸(ADMA)是一種內(nèi)源性

2、NOS抑制劑，能競(jìng)爭(zhēng)性的抑制NO的生成。血漿中的ADMA 80％經(jīng)二甲基精氨酸二甲胺水解酶1和2(DDAH1和DDAH2)水解代謝而失活。因此，體內(nèi)DDAH酶活性的高低可通過(guò)影響ADMA的代謝，從而影響NOS的活性和NO的水平，而遺傳因素可能是影響體內(nèi)DDAH酶活性的因素之一。由遺傳因素所導(dǎo)致的個(gè)體間DDAH酶活性的差異可能通過(guò)影響ADMA的體內(nèi)濃度，從而影響機(jī)體對(duì)高血壓病的易感性。 目的：通過(guò)病例-對(duì)照研究，探討DDAH1基因

3、多態(tài)性與中國(guó)漢族人群高血壓病遺傳易感性的關(guān)系。 方法：應(yīng)用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的公用資源，對(duì)中國(guó)人群DDAH1基因的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)進(jìn)行登記，通過(guò)連鎖不平衡分析和單倍型構(gòu)建，分析該基因區(qū)域SNP位點(diǎn)間的連鎖不平衡情況，選擇待分型的單倍型標(biāo)簽SNP(haplotype tag SNP，htSNP)。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)的分析方法

4、，在417例原發(fā)性高血壓患者和436例健康人群中對(duì)DDAH1基因的單倍型標(biāo)簽SNP進(jìn)行基因分型。應(yīng)用高效液相色譜-質(zhì)譜(HPLC-MS)聯(lián)用法檢測(cè)血漿中ADMA的水平。應(yīng)用χ2檢驗(yàn)比較組間基因型及等位基因頻率的分布的異同，應(yīng)用非條件Logistic回歸分析對(duì)風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行校正，確定DDAH1基因型與高血壓病遺傳易感性間的相關(guān)關(guān)系。 結(jié)果：①中國(guó)人群DDAH1基因位點(diǎn)共發(fā)現(xiàn)了29個(gè)常見(jiàn)SNP，這些SNP導(dǎo)致該基因區(qū)域6種主要單倍型形

5、成。②病例組和對(duì)照組中DDAH1 C143611G(rs3087894)位點(diǎn)CC、CG和GG基因型頻率分別為57.4％、33.8％和8.8％以及51.6％、42.1％和6.3％，兩組間基因型的分布存在顯著的差異(P<0.05)；C144563T(rs3813600)位點(diǎn)CC、TC和TT基因型頻率分別為45.6％、45.4％和9.0％以及55.2％、37.8％和7.0％，兩組間基因型的分布也存在顯著的差異(P<0.05)。③通過(guò)對(duì)性別、發(fā)

6、病年齡、吸煙、飲酒、高脂血癥的有無(wú)以及一級(jí)親屬高血壓病家族史的有無(wú)等高血壓的風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行校正，Logistic回歸分析結(jié)果顯示，與基因型為143611CC的個(gè)體相比較，基因型為143611CC和143611GG的個(gè)體患原發(fā)性高血壓病的風(fēng)險(xiǎn)顯著降低(OR=0.701，95％CI：0.510-0.962，P=0.028)；與基因型為的144563CC的個(gè)體相比較，基因型為144563CT和144563TT(或攜帶144563T等位)的個(gè)體患

7、高血壓病的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加(OR=1.474，95％可信區(qū)間：1.103-1.969，P=0.009)。④病例和對(duì)照組DDAH1 C143611G和C144563T兩個(gè)SNP位點(diǎn)的組合基因型分布存在顯著的差異(x2=18.63，P=0.017)，主要表現(xiàn)為病例組143611CC/144563TC和143611CC/144563TT基因型頻率顯著高于對(duì)照組(x2=7.604，P=0.006).Logistic回歸分析結(jié)果顯示，與其他基因型組合

8、相比較，基因型為143611CC同時(shí)144563位攜帶T等位的個(gè)體患高血壓病的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加(OR=1.792，95％CI：1.263-2.548，P=0.001)。⑤高血壓病患者和對(duì)照組人群血漿ADMA濃度分別為0.766±0.230 μmol/L和0.503±0.181μmol/L，兩組人群間血漿ADMA濃度存在顯著的差異(P<0.001)。⑥在對(duì)照人群中，攜帶DDAH1 143611G等位的個(gè)體血漿ADMA濃度顯著增高(P=0.01

9、0)，而攜帶144563T等位的個(gè)體血漿中ADMA濃度明顯降低(P=0.041)：對(duì)兩個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行聯(lián)合分析的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，基因型為143611CC同時(shí)144563位攜帶T等位的個(gè)體血漿ADMA濃度顯著低于其他基因型組合的個(gè)體(P=0.015)。⑦在高血壓病例中，DDAH1 C143611G和C144563T兩個(gè)SNP位點(diǎn)各基因型間血漿ADMA的濃度無(wú)顯著差異，但在有冠心病病史的患者中，基因型為143611CC/144563TT(n=5)

10、、143611CC/144563TC(n=17)和其他基因型組合(n=30)的個(gè)體血漿ADMA的濃度存在顯著差異，分別為1.107±0.257μmol/L、0.751±0.193μmol/L和0.729±0.165μmol/L(P=0.0004)。結(jié)論：①DDAHI基因的遺傳多態(tài)性與中國(guó)人原發(fā)性高血壓的易感性相關(guān)，DDAHI基因是原發(fā)性高血壓重要的易感基因；②高血壓病患者血漿ADMA的水平升高；③DDAH1基因C143611G和C144