二甲基精氨酸二甲胺水解酶2基因多態(tài)性與湖南地區(qū)漢族人群原發(fā)性高血壓易感性的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、原發(fā)性高血壓或高血壓病是由多種環(huán)境因素與遺傳因素共同作用所致的多基因疾病，血管內(nèi)皮功能紊亂是高血壓病等多種心血管疾病的早期表現(xiàn)和風(fēng)險(xiǎn)因素。血管內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)分泌內(nèi)源性活性物質(zhì)如一氧化氮（nitric oxide，NO）和內(nèi)皮素（endothelium，ET）等，從而參與心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)。NO由L-精氨酸在一氧化氮合酶（NO synthase，NOS）的催化作用下生成。非對(duì)稱(chēng)二甲基精氨酸（asymmetric dimethylargin

2、ine，ADMA）是一種內(nèi)源性NOS抑制劑，能競(jìng)爭(zhēng)性的抑制NO的生成。人體內(nèi)ADMA主要經(jīng)二甲基精氨酸二甲胺水解酶1和2（dimethylarginine dimethylaminohydrolases，DDAH1和DDAH2）水解代謝而失活。因此，體內(nèi)DDAH酶活性的高低可通過(guò)影響ADMA的代謝，從而影響NOS的活性和NO的水平，DDAH1和DDAH2基因是高血壓病易感重要的候選基因。 目的：通過(guò)病例-對(duì)照研究，探討DDAH2

3、基因多態(tài)性與中國(guó)湖南漢族人群高血壓病遺傳易感性的關(guān)系。 方法；應(yīng)用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的公用資源，對(duì)中國(guó)人群DDAH2基因的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）進(jìn)行登記，通過(guò)連鎖不平衡分析和單倍型構(gòu)建，選擇單倍型標(biāo)簽SNP（haplotype tag SNP，htSNP）。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（polymerase chain reaction-restrictio

4、n fragment length polymorphism，PCR-RFLP）的分析方法，對(duì)639例原發(fā)性高血壓患者和609例健康人群中對(duì)DDAH2基因的單倍型標(biāo)簽SNP G-1415A和A-1150C進(jìn)行基因分型。應(yīng)用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)血漿中ADMA的濃度。應(yīng)用X2檢驗(yàn)比較組間基因型、等位基因和單倍型頻率分布的異同，應(yīng)用非條件Logistic回歸分析對(duì)高血壓病的風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行校正，確定DDAH2基因型與高血壓病遺傳易感性間的

5、相關(guān)關(guān)系。 結(jié)果：1）成功建立了DDAH2 G-1415A和A-1150C位點(diǎn)基因分型的PCR-RFLP方法并通過(guò)PCR產(chǎn)物測(cè)序?qū)Ψ椒ǖ臏?zhǔn)確性進(jìn)行了驗(yàn)證。2）DDAH2 G-1415A和A-1150C位點(diǎn)基因型和等位基因頻率在所有病例和對(duì)照人群中無(wú)顯著的差異，但通過(guò)對(duì)高血壓病的風(fēng)險(xiǎn)因素和DDAH2 G-1415A位點(diǎn)基因型進(jìn)行校正，Logistic回歸分析顯示DDAH2 A-1150C基因型與高血壓病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（OR=1.2

6、03，95％ CI：1.005～1.440，p=0.044）；3）通過(guò)對(duì)性別進(jìn)行分層，發(fā)現(xiàn)男性病例和對(duì)照人群中DDAH2 A-1150C基因型和等位頻率分布無(wú)顯著的差異，但Logistic回歸分析后A-1150C位點(diǎn)基因型與男性高血壓病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（OR=1.247，95％CI：1.000～1.555，p=0.050）；男性病例組和對(duì)照組中DDAH2 G-1415A位點(diǎn)基因型和等位頻率分布以及女性病例組和對(duì)照組中兩個(gè)SNP位點(diǎn)基因型和

7、等位頻率分布均無(wú)顯著的差異。4）通過(guò)對(duì)年齡進(jìn)行分層，發(fā)現(xiàn)在<50歲個(gè)體中，病例組DDAH2-1150C等位的頻率（36.9％）顯著高于對(duì)照組（31.5％，p=0.041），且DDAH2 A-1150C位點(diǎn)基因型與高血壓病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（OR=1.308，95％ CI：1.029～1.662，p=0.028）；兩個(gè)位點(diǎn)SNP與>50歲個(gè)體高血壓病的易感性都不相關(guān)。5）病例組和對(duì)照組中DDAH2 G-1415A和A-1150C位點(diǎn)構(gòu)成的單倍