類細菌素生產菌LL18-4的固定化培養(yǎng)研究.pdf

1、從四川某酒廠采集的酒糟和酒糟浸出液為樣本中篩選得到一株對多種革蘭氏陽性指示菌、革蘭氏陰性指示菌及部分霉菌具有廣譜抗菌活性的類細菌素產生菌，菌株編號LL18-4。經形態(tài)觀察及生理生化實驗和16S rDNA PCR擴增和序列測定，鑒定該菌為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)。 由于游離發(fā)酵等傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵法存在著局限性，近20年來固定化技術已經得到廣泛的關注，固定化方法具有菌體密度高，反應快，抗干擾能力強，可縮短發(fā)酵

2、周期，提高轉化率，節(jié)省人力、物力以及產物分離方便，菌體可重復連續(xù)使用的優(yōu)點。本文以海藻酸鈣為材料，固定枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)LL18-4，研究不同的固定化小球制備對類細菌素效價的影響。結果表明，利用3％海藻酸鈉在2％CaCl<,2>條件下，得到固定化細胞顆粒的類細菌素效價和穩(wěn)定性較好，可維持216h無破裂。 通過單因素法對其固定化菌進行發(fā)酵條件的研究發(fā)現(xiàn)，當培養(yǎng)溫度為37℃，pH值6.5，接種量1％，培

3、養(yǎng)時間72h靜止培養(yǎng)后，固定菌所產類細菌素的抑菌活性高，最高效價能達到334.2U/mL。 對固定化枯草芽孢桿菌LL18-4進行半連續(xù)培養(yǎng)的研究，結果表明通過216h三批次循環(huán)的半連續(xù)培養(yǎng)，固定菌活性能維持在260.9 U/mL 以上。對該類細菌素生物學特性進行初步研究，用蛋白酶K、溶菌酶處理發(fā)酵上清液后，該類細菌素對蛋白酶K部分敏感，對溶菌酶不敏感；經高溫處理一定時間后抑菌活性保持較完整，證明其熱穩(wěn)定性較高；抑菌活性pH范圍是