乳酸菌素產(chǎn)生菌的分離鑒定及培養(yǎng)條件的初步研究.pdf

1、乳酸菌是一類能利用可發(fā)酵的糖產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌的通稱。長期以來，乳酸菌廣泛應(yīng)用于乳制品、蔬菜及肉制品等發(fā)酵食品的生產(chǎn)中。在其生長代謝中，乳酸菌能產(chǎn)生具有抑菌或殺菌效果的細(xì)菌素，不僅可以改善腸道生態(tài)，還可以用于食品與飼料的防腐，細(xì)菌素在抑制各種食物腐敗菌方面的重要作用已愈來愈多的受到人們的關(guān)注。 本實驗對乳酸菌素產(chǎn)生菌進行分離，從辣白菜中分離得到四個理想菌株Ⅱ4、Ⅱ11、Ⅱ13、Ⅱ32。利用高效液相色譜檢測其發(fā)酵液，初步確定4菌株

2、均為乳酸菌，其中Ⅱ32菌株產(chǎn)乳酸最多、對各指示菌的抑制作用最顯著，只對該菌株作進一步的研究。Ⅱ32菌株在MRS培養(yǎng)基上可以生長，最適生長溫度為28℃，革蘭氏染色呈陽性，無芽孢。過氧化氫酶、淀粉水解、硫化氫產(chǎn)生、乙酰甲基甲醇試驗(V-P試驗)、石蕊牛奶胨化、明膠液化試驗為陰性；葡萄糖、葡萄糖酸鹽、石蕊牛奶產(chǎn)酸、石蕊牛奶還原為陽性。 通過API生化反應(yīng)試驗、16SrDNA測序可進一步確定該菌株是L.aplantarum或L.para

3、plantarum。最終通過對recA-gene的PCR產(chǎn)物檢測，鑒定菌株Ⅱ32為Lactobacillusparaplantarum(類植物乳桿菌)。牛津杯抑菌試驗顯示，該菌株的發(fā)酵液不僅對多數(shù)G+細(xì)菌的生長有較強的抑制作用，而且對大腸桿菌、沙門氏菌等G-細(xì)菌的生長也具有明顯的抑制作用，但對真菌沒有活性。 另外，本實驗還對Ⅱ32的發(fā)酵條件進行研究，實驗采用的是單因子篩選法：即保持其他培養(yǎng)條件不變，只改變其中一個條件的方法，確定

4、出最適合生長、抑菌活性最大的培養(yǎng)基組分和培養(yǎng)條件。 ①確定Ⅱ32最適合發(fā)酵的培養(yǎng)基： 通過實驗表明，亞苯基乙醇蔗糖液體培養(yǎng)基、改進的乳桿菌選擇培養(yǎng)基、M-腸球菌液體培養(yǎng)基、MRS液體培養(yǎng)基等四種培養(yǎng)基中MRS液體培養(yǎng)基最適合于Ⅱ32的生長且抑菌活性最大。 ②確定出最適合Ⅱ32的培養(yǎng)條件： 通過實驗表明最佳碳源為麥芽糖；氮源為酵母粉，濃度為2.0﹪；最佳金屬離子為Ni2+；最適的pH值范圍為5.5～7.0，