優(yōu)良乳酸菌的分離鑒定及復(fù)合菌粉制備工藝的研究.pdf

1、為了篩選性狀優(yōu)良的乳酸菌菌株，本研究對(duì)天然發(fā)酵玉米青貯飼料樣品中的乳酸菌進(jìn)行了分離和鑒定，通過細(xì)菌的形態(tài)特征選出17個(gè)單菌落，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，通過生理生化試驗(yàn)、16s rRNA序列分析及系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建對(duì)篩選出的菌株進(jìn)行鑒定;以其中三株乳酸菌作為發(fā)酵菌種，以pH值和活菌數(shù)為指標(biāo)，確定菌種配比;進(jìn)而采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化發(fā)酵條件，并采用真空冷凍干燥法制得復(fù)合乳酸菌菌粉制劑。研究?jī)?nèi)容如下:
　　(1)從天然發(fā)酵玉米飼料中分離純化出17株菌

2、株，8株植物乳桿菌(3，5，6，8，11，13，15，16)，3株玉米乳桿菌(1，4，10)，3株乳酸片球菌(7，14，17)，1株香腸乳桿菌(2)，1株干酪乳桿菌(9)，1株副干酪乳桿菌(12)。試驗(yàn)通過測(cè)定產(chǎn)酸速率和生長(zhǎng)曲線篩選出菌株3，5，6，7，9，11，15，16為產(chǎn)酸較快、生長(zhǎng)迅速的優(yōu)良乳酸菌菌株。
　　(2)通過體外耐酸試驗(yàn)、菌株耐膽鹽試驗(yàn)及抑菌試驗(yàn)，優(yōu)選出菌株3，7，9作為發(fā)酵菌株。三株菌相互混合培養(yǎng)時(shí)，均未表現(xiàn)出

3、拮抗作用。且當(dāng)菌株配比為3∶2∶1時(shí)，產(chǎn)酸能力和發(fā)酵后活菌數(shù)均比其它組合優(yōu)。
　　(3)優(yōu)化后的復(fù)合乳酸菌培養(yǎng)條件為37℃培養(yǎng)，培養(yǎng)基初始pH值為7.0，接種量為3％。優(yōu)化后培養(yǎng)基成分為乳糖30g/L，大豆肽粉-乳清蛋白粉(1∶1)40g/L，乙酸鈉7g/L，吐溫-804mL/L，硫酸鎂0.5g/L、硫酸錳0.25g/L。優(yōu)化后活菌數(shù)達(dá)到5.51×109cfu/mL，與在基礎(chǔ)培養(yǎng)基條件下相比提高3.7倍，同時(shí)，優(yōu)選后的成分相應(yīng)的節(jié)