傳統(tǒng)酸菜中抗菌性乳酸菌的篩選及其細(xì)菌素研究.pdf

1、本實驗以內(nèi)蒙古東部地區(qū)牧民家庭傳統(tǒng)方式發(fā)酵的酸菜液中分離出的84株乳酸菌（球菌60株，桿菌24株）為供試菌株，以大腸桿菌AS1.487為指示菌，采用平板打孔擴散法進(jìn)行抑菌性能初步篩選。再以蠟狀芽孢桿菌、藤黃微球菌及部分真菌為指示菌進(jìn)行抑菌性能復(fù)篩，并對備選菌株所產(chǎn)細(xì)菌素的生物學(xué)特性及純化進(jìn)行了初步探討。結(jié)果表明，84株供試乳酸菌中有27株乳酸菌對指示菌大腸桿菌AS1.487抑菌效果明顯（抑菌圈均達(dá)到14.0mm以上）。經(jīng)過多種指示菌的反

2、復(fù)篩選，獲得了一株抑菌作用較廣的乳酸菌素產(chǎn)生菌 S1-4。該菌株不僅能抑制典型的G+和G-細(xì)菌（如蠟樣芽孢桿菌、大腸桿菌等），且排除酸干擾后對擴展青霉等真菌仍有一定的抑制作用。乳酸菌S1-4所產(chǎn)細(xì)菌素的活性區(qū)域為酸性或弱酸環(huán)境，pH4.0時抑菌性能最強，且該細(xì)菌素pH值在2.0-5.5之間對熱有耐受性，121℃處理30 min仍具有93.42％活性。經(jīng)酶處理得知，該乳酸菌所產(chǎn)的細(xì)菌素對木瓜蛋白酶較敏感（抑菌活性下降了18.42%），但對

3、胃蛋白酶和胰蛋白酶敏感性較弱。以硫酸銨梯度沉淀法分離并收集乳酸菌S1-4的發(fā)酵上清液，采用膜透析技術(shù)獲得的分子量在3.5kDa-8kDa的組分對蠟樣芽孢桿菌的抑菌效果最明顯。且經(jīng)SephadexG-15柱層析純化所得三個峰中，第二個峰收集的組分具有一定的抑菌活性。經(jīng)推斷該細(xì)菌素的主要抑菌活性物質(zhì)分子量約為6.7KDa，是一種小分子多肽，此峰的精純組分可用于進(jìn)一步研究。最后通過生理生化及分子生物學(xué)實驗等特性研究，初步鑒定乳酸菌S1-4為植