注射用匹多莫德的免疫活性研究.pdf

1、匹多莫德是是一種人工合成的高純度二肽，是一種口服給藥能夠確知其生物利用度的免疫促進(jìn)劑。其藥理作用包括：激活自然殺傷細(xì)胞，促進(jìn)巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞的吞噬活性，促進(jìn)有絲分裂原引起的淋巴細(xì)胞增殖，促進(jìn)各種細(xì)胞因子如白介素-2和γ-干擾素的分泌，從而提高細(xì)胞免疫功能。臨床上匹多莫德經(jīng)常和抗生素和抗病毒藥物合用治療感染性疾病，可減輕癥狀，減少復(fù)發(fā)。但臨床上應(yīng)用的匹多莫德多為口服制劑，為加快其吸收，增加其生物利用度，現(xiàn)將其制成注射用凍干粉針劑。

2、r>　　 為使注射用匹多莫德能夠進(jìn)入臨床，對其免疫活性進(jìn)行研究。
　　 第一部分通過測定小鼠血清溶血素抗體生成及胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，研究了注射用匹多莫德對正常及免疫功能低下小鼠體液免疫和免疫器官的影響。本部分選取Balb/c 小鼠60只，分別尾靜脈注射低、中、高不同劑量匹多莫德，以生理鹽水靜脈注射為陰性對照，左旋咪唑口服為陽性對照，共給藥14天。于給藥第11天開始，半數(shù)小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺80 mg·kg-1·day-1，共4

3、天，造成免疫抑制模型。給藥第10天每只小鼠腹腔注射綿羊紅細(xì)胞，給藥結(jié)束后取小鼠血清，測定在補體（豚鼠血清）的作用下，小鼠血清對綿羊紅細(xì)胞的半數(shù)溶血值HC50。小鼠取血后，稱重，處死，取胸腺和脾臟，測定胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。結(jié)果表明：對于正常小鼠，匹多莫德各劑量組的HC50分別為158.044±1.669，157.413±6.647，157.571±3.919，與生理鹽水對照組(157.361±1.525)比較無顯著差異，胸腺指數(shù)分別為2.

4、469±0.267，2.527±0.260，2.590±0.277，與生理鹽水對照組比較有顯著差異(P<0.05，P<0.05，P<0.01)，脾臟指數(shù)分別為5.355±0.779，5.774±0.466，5.690±0.676，與生理鹽水對照組比較有顯著差異(P<0.05，P<0.05，P<0.01)；對于免疫功能低下小鼠，匹多莫德各劑量組的HC50分別為8.044±1.304，8.517±1.633，7.939±1.045，與免疫抑

5、制模型對照組(8.517±2.361)比較無顯著性差異，胸腺指數(shù)分別為1.377±0.291，1.676±0.301，1.622±0.331，其中匹多莫德中、高劑量組與免疫抑制模型組比較有顯著差異(P<0.05)，脾臟指數(shù)分別為3.139±0.544，3.402±0.374，3.593±0.501，其中匹多莫德中、高劑量組與免疫抑制模型組比較有顯著差異(P<0.05)。因此，注射用匹多莫德對Balb/c 小鼠血清溶血素形成能力沒有明顯的

6、促進(jìn)作用，但可提高正常和免疫功能低下Balb/c小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。
　　 第二部分采用MTT 法研究注射用匹多莫德對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響。本部分選取Balb/c 小鼠60只，分別尾靜脈注射低、中、高不同劑量匹多莫德，以生理鹽水靜脈注射為陰性對照，左旋咪唑口服為陽性對照，共給藥14天。于給藥第11天開始，半數(shù)小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺80 mg·kg-1·day-1，共4天，造成免疫抑制模型。于末次給藥1 小時后無菌取脾制成

7、脾細(xì)胞懸液。將此懸液點入96 孔板中，MTT 法測定各脾細(xì)胞懸液在Con-A或LPS 誘導(dǎo)下的增殖活性，結(jié)果以O(shè)D 值表示。結(jié)果表明：
　　 在Con-A 誘導(dǎo)下，匹多莫德低、中、高三個劑量其OD 值分別為0.890±0.167，0.947±0.135，1.120±0.097，比生理鹽水組(0.630±0.033)有顯著提高（P<0.05，P<0.01,P<0.001）。應(yīng)用環(huán)磷酰胺造成小鼠免疫功能低下模型后，匹多莫德低、中、高

8、各劑量組的OD 值分別為0.499±0.067，0.524±0.043，0.683±0.099，與免疫抑制模型對照組(0.265±0.021)比較有顯著提高(P<0.001)；在LPS 誘導(dǎo)下，匹多莫德低、中、高三個劑量其OD 值分別為0.545±0.044，0.542±0.064，0.714±0.106，比生理鹽水組(0.319±0.021)有顯著提高（P<0.001）。應(yīng)用環(huán)磷酰胺造成小鼠免疫功能低下模型后，匹多莫德低、中、高各劑量

9、組的OD 值分別為0.277±0.037，0.296±0.036，0.298±0.025，與免疫抑制模型對照組(0.145±0.043)比較有顯著提高(P<0.01，P<0.01，P<0.001)。因此，注射用匹多莫德能增強在Con-A和LPS 誘導(dǎo)下正常和免疫功能低下Balb/c 小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖能力。
　　 第三部分用中性紅比色法研究注射用匹多莫德對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響。本部分選取Balb/c 小鼠60只，分別

10、尾靜脈注射低、中、高不同劑量匹多莫德，以生理鹽水靜脈注射為陰性對照，左旋咪唑口服為陽性對照，共給藥14天。于給藥第11天開始，半數(shù)小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺80 mg·kg-1·day-1，共4天，造成免疫抑制模型。末次給藥后1 小時，處死小鼠，取腹腔巨噬細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液加入96 孔板中，酶標(biāo)儀540nm 處測定各小鼠巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的能力，結(jié)果以O(shè)D 值表示。結(jié)果表明：匹多莫德低、中、高三個劑量組其OD 值分別為0.516±0

11、.047，0.596±0.076，0.968±0.271，其中中、高劑量組比生理鹽水組(0.490±0.027)有顯著提高(P<0.05，P<0.01）；應(yīng)用環(huán)磷酰胺造成小鼠免疫功能低下模型后，匹多莫德低、中、高各劑量組的OD 值分別為0.353±0.069，0.421±0.054，0.418±0.053，與免疫抑制模型對照組(0.295±0.037)比較有顯著提高(P<0.05，P<0.01，P<0.05)。因此，注射用匹多莫德可提高