豬瘟口服疫苗保護劑篩選及免疫效果評價.pdf

1、豬瘟(classical swine fever,CSF)是由豬瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一種豬的高度接觸性傳染病。該病呈急性或慢性感染，在許多國家和地區(qū)均有發(fā)生，給養(yǎng)豬業(yè)造成極大的危害。目前，疫苗接種仍是控制豬瘟疫情的主要手段?，F(xiàn)階段我國使用的豬瘟疫苗主要有豬瘟兔化弱毒株、家兔脾淋組織苗、乳豬腎細(xì)胞苗等注射型疫苗。國外報道豬瘟疫苗口服免疫獲得了很好的效果，經(jīng)口服免疫，可減少對豬只的

2、應(yīng)激且省時省力。因此研究擬通過篩選理想的保護劑，制備可經(jīng)口服途徑免疫的豬瘟疫苗。
　　本研究采用兩種方法制備口服抗原：以豬瘟病毒疫苗株與重組LTRG蛋白及凍干保護劑配伍，制備凍干抗原；另外利用殼聚糖-海藻酸鈉包埋重組CSFV E2蛋白，制備微囊抗原；兩種抗原分別口服飼喂小鼠，以細(xì)胞免疫指標(biāo)和體液免疫指標(biāo)評價抗原的免疫效果，篩選理想的抗原保護劑。
　　1.蛋白抗原包埋及免疫活性檢測
　　構(gòu)建CSFV E2基因的原核表達(dá)質(zhì)

3、粒并表達(dá)蛋白，經(jīng)純化后將其作為抗原，與黏膜佐劑蛋白LTRG共同包埋制備殼聚糖-海藻酸鈉微球，然后口服免疫小鼠，檢測其免疫效果。結(jié)果，包埋E2和LTRG蛋白組小鼠的血清IgG和黏膜IgA水平均顯著高于對照組，高于E2蛋白包埋組，表明LTRG蛋白作為一種黏膜佐劑，增強了小鼠的免疫反應(yīng)。此外，包埋E2和LTRG蛋白組小鼠的抗體水平顯著高于E2+LTRG蛋白組，說明殼聚糖-海藻酸鈉微球作為包埋載體，將抗原進(jìn)行了有效的呈遞，從而誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生免疫反

4、應(yīng)。
　　2.凍干保護劑篩選及免疫效果評價
　　研究配比了不同組分的凍干保護劑，包括明膠、乳糖和甘氨酸，與黏膜佐劑LTRG蛋白、CSFV按比例混合，經(jīng)優(yōu)化凍干工藝后，制備了4種CSFV的凍干苗。口服免疫小鼠，測定血清IgG和黏膜IgA抗體效價。結(jié)果，含明膠和甘氨酸的試驗2組和含明膠的試驗4組經(jīng)凍干后外觀形態(tài)較好，水溶后呈現(xiàn)澄清狀態(tài)；試驗2組和試驗4組的凍干苗經(jīng)口服免疫，誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的IgG抗體水平極顯著高于CSFV組、CSF

5、V+LT組及其他試驗組；二免7天后試驗2組小鼠產(chǎn)生的IgA抗體極顯著高于其他組。而且，試驗2組小鼠脾臟的IFN-γ和IL-4細(xì)胞因子的表達(dá)量也極顯著高于其他組。表明，在凍干過程中，明膠和甘氨酸對豬瘟病毒起到了良好的保護作用，提高了豬瘟病毒疫苗經(jīng)口服途徑的免疫效果。
　　利用殼聚糖-海藻酸鈉包埋制備重組蛋白微球抗原，能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生良好的體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫應(yīng)答，證實包埋蛋白抗原具有良好的免疫效果。配伍不同組分的豬瘟病毒疫苗保護劑，