杏仁核對大鼠哮喘發(fā)作調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討大鼠杏仁核在哮喘發(fā)作中的作用,并探討其調(diào)控哮喘發(fā)作的途徑。 方法：取健康雄性成年SD大鼠,腹腔注射含有卵蛋白(OVA)的抗原致敏液,霧化吸入1％OVA溶液誘發(fā)哮喘發(fā)作,經(jīng)行為學(xué)觀察,肺功能測定,支氣管肺泡灌洗液(BALF)中炎細(xì)胞和細(xì)胞因子檢測,肺組織HE染色等多種方法,確定哮喘模型制備成功。應(yīng)用玻璃微電極記錄哮喘狀態(tài)下內(nèi)側(cè)杏仁核(MeA)和中央杏仁核(CeA)中神經(jīng)元細(xì)胞外放電的情況。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法(SABC

2、法)觀察哮喘狀態(tài)下MeA和CeA內(nèi)Fos陽性神經(jīng)元表達(dá)含量的變化,及下丘腦室旁核(PVN)內(nèi)Fos、催產(chǎn)素(OT)陽性(OT-positive)神經(jīng)元和Fos/OT雙重標(biāo)記陽性神經(jīng)元表達(dá)含量的變化。運(yùn)用紅藻氨酸(KA)分別損毀哮喘大鼠MeA和CeA,比較損毀前后PVN內(nèi)Fos/OT雙標(biāo)神經(jīng)元分布,及呼吸功能和氣道炎癥的變化,進(jìn)一步確定MeA和CeA在哮喘發(fā)作中的作用。向PVN內(nèi)注射麥芽凝集素-辣根過氧化物酶(WGA-HRP)逆行追蹤劑,

3、結(jié)合Fos免疫組織化學(xué)染色法,觀察杏仁核內(nèi)Fos/HRP雙重標(biāo)記陽性神經(jīng)元的分布情況。以確定杏仁核-PVN通路是否參與哮喘發(fā)作。 結(jié)果：(1)大鼠哮喘發(fā)作時MeA內(nèi)神經(jīng)元放電頻率較激發(fā)前增加(p<0.05),CeA內(nèi)神經(jīng)元放電頻率率較激發(fā)前也增加(p<0.01)。(2)哮喘大鼠MeA和CeA內(nèi)可見密集的Fos陽性神經(jīng)元分布(p<0.01)。(3)哮喘大鼠PVN中Fos、OT陽性神經(jīng)元和Fos/OT雙重標(biāo)記神經(jīng)元較正常組顯著增加(

4、p<0.01)。(4)損毀MeA或CeA后,大鼠呼氣時程/吸氣時程(TE/TI)和氣道阻力(Raw)較哮喘對照組比較均減小,每分通氣量(MVV)和肺順應(yīng)性(Cdyn)則增大(p<0.01);BALF中嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)比率,IL-4含量較哮喘對照組均減少(p<0.01),Ⅰ型T輔助細(xì)胞/Ⅱ型T輔助細(xì)胞(Th1/Th2)值增大(p<0.01);PVN內(nèi)Fos、OT陽性神經(jīng)元和Fos/OT雙標(biāo)神經(jīng)元分布較哮喘組少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<