轉(zhuǎn)基因冰草植株檢測、抗性鑒定及原材料篩選研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究以獲得的轉(zhuǎn)基因冰草植株為材料,通過對轉(zhuǎn)基因冰草植株的分子檢測、抗性測定,獲得轉(zhuǎn)基因冰草植株并確定外源基因在冰草植株中的整合及表達,為轉(zhuǎn)基因冰草植株的后期研究提供理論依據(jù);確定轉(zhuǎn)基因植株的抗旱、耐鹽性,篩選抗性強的轉(zhuǎn)基因冰草植株,盡可能短時間內(nèi)培育出適合我國西部地區(qū)抗旱、耐鹽的轉(zhuǎn)基因冰草新品種。同時,通過9種冰草對干旱脅迫和鹽脅迫的反應,篩選出評價冰草抗逆性的鑒定指標;并通過冰草抗旱、耐鹽性評價,選出抗旱、耐鹽性強的冰草品種,為改良

2、我國西部地區(qū)沙化、鹽漬化現(xiàn)象和進一步進行冰草的遺傳轉(zhuǎn)化提供基礎材料。 本研究的初步結(jié)果如下: 1.PCR和Southern雜交確定bar、CBF4基因和pSCS基因已整合到冰草基因組中,在轉(zhuǎn)CBF4-bar 冰草植株檢測中,獲得了29株轉(zhuǎn)bar 基因冰草株系,轉(zhuǎn)化頻率為7.67%:31株轉(zhuǎn)CBF4基因冰草植株,轉(zhuǎn)化頻率為8.20%:其中共轉(zhuǎn)化植株為5株,共轉(zhuǎn)化頻率為1.32%。在轉(zhuǎn)pSCS-bar基因冰草植株中,獲得了2

3、6株轉(zhuǎn)bar基因冰草植株,49株轉(zhuǎn)pSCS基因冰草植株,其中共轉(zhuǎn)化植株為15株,共轉(zhuǎn)化頻率為15.78%。轉(zhuǎn)CBF4部分冰草植株的整合數(shù)為2-5:轉(zhuǎn)bar冰草植株的整合數(shù)為1-3;轉(zhuǎn)pSCS冰草植株的整合數(shù)為1-2。Northern雜交檢測表明,部分轉(zhuǎn)基因冰草植株中的外源基因在轉(zhuǎn)錄水平表達。 2.在干旱脅迫下,轉(zhuǎn)CBF4基因冰草植株較未轉(zhuǎn)基因植株的葉片相對含水量下降較慢;質(zhì)膜透性、丙二醛含量增加較少;葉綠素含量較高;脯氨酸和可溶

4、性蛋白含量增加較大;SOD、POD、CAT活性較高。轉(zhuǎn)CBF4基因冰草植株抗旱性大于非轉(zhuǎn)基因冰草植株,CBF4基因在轉(zhuǎn)基因冰草植株體內(nèi)表達。 3.在干旱脅迫和鹽脅迫下,轉(zhuǎn)pSCS基因冰草植株較未轉(zhuǎn)基因植株的葉片相對含水量下降較慢;質(zhì)膜透性、丙二醛含量增加較少;葉綠素含量較高;脯氨酸和可溶性蛋白含量增加較大:SOD、POD、CAT活性較高。轉(zhuǎn)p5C5基因冰草植株抗旱性、耐鹽性明顯增加,p5CS基因在轉(zhuǎn)基因冰草植株體內(nèi)表達。

5、 4.不同冰草對干旱脅迫和鹽脅迫的反應程度不同,其抗旱、耐鹽能力的大小是多種代謝的綜合表現(xiàn),單一的指標不能客觀地反映其真實抗性??陀^評價冰草抗旱、耐鹽性應采用多種指標進行綜合分析。 5.干旱脅迫下,冰草種子萌發(fā)和幼苗抗旱性強弱表現(xiàn)不同,綜合評價9種冰草抗旱性強弱順序為:249>738,MN>812>82,1007>790,268>114。適合作為抗旱轉(zhuǎn)基因冰草材料的是:249,MN和738三種冰草。 6.冰草種子和幼苗在

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