MTI2和Bt轉(zhuǎn)基因擬南芥的鑒定及篩選.pdf

1、在抗蟲轉(zhuǎn)基因育種過程中，轉(zhuǎn)基因植株的鑒定、篩選及生物測定是非常重要的環(huán)節(jié)。本研究從獲得的轉(zhuǎn)芥菜胰蛋白酶抑制劑基因(MT12)擬南芥第一代種子T<,1>開始進(jìn)行抗性植株的篩選純化，直到T<,5>代抗性穩(wěn)定不再分離時結(jié)束，結(jié)合PCR檢測，對通過抗性篩選的轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行鑒定，獲得抗性純合的轉(zhuǎn)基因植株。隨后對轉(zhuǎn)MT12基因材料和轉(zhuǎn)Bt基因(改良SN19基因)材料進(jìn)行生物測定，比較和鑒定兩種抗蟲基因?qū)[翅目害蟲小菜蛾的抗性水平。篩選出具有較好抗蟲

2、性的轉(zhuǎn)Bt基因擬南芥材料，進(jìn)而對這些材料連續(xù)兩代回交，并對每代材料進(jìn)行室內(nèi)生物測定，分析回交次數(shù)對Bt基因抗蟲性的影響。主要結(jié)果如下： 1．對轉(zhuǎn)MT12基因材料進(jìn)行連續(xù)5代的卡那霉素篩選和PCR檢測，共獲得100株純合陽性植株，且每個陽性植株都收獲了大量種子。 2．兩種轉(zhuǎn)基因材料抗小菜蛾生物測定結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)MT12基因材料不能有效抗蟲，僅對害蟲生長起抑制作用；轉(zhuǎn)化改良的SN19基因材料抗蟲性很強，對小菜蛾有很高的致死率，