Bt轉基因結球甘藍的遺傳分析和檢測.pdf

1、結球甘藍(Brassica olerecea var. capitata)是中國的一種重要蔬菜,栽培面積已達幾十萬公頃.生產(chǎn)上結球甘藍蟲害發(fā)生相當嚴重,造成了產(chǎn)量和品質的損失.為害結球甘藍的主要害蟲和鱗翅目的昆蟲,其中主要包括菜粉蝶和小菜蛾等.由于在已有的種質資源中很難找到可用的抗蟲材料這使得蔬菜常規(guī)抗蟲育種受到了限制.利用基因工程技術手段培育抗蟲蔬菜新品種是農(nóng)業(yè)發(fā)展的一個重要方向.基因工程技術不僅安全有效而且投資少、見效快、特異性殺滅

2、害蟲和污染環(huán)境.植物基因工程為抗性育種提供了一種有效的方法.人們已從細菌中分離得到蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)毒蛋白基因(Bt).其蛋白產(chǎn)物對鱗翅目昆蟲具有特異的毒殺作用而對高等動物和人無害.因此,將Bt基因轉入結球甘藍而獲得抗蟲材料而成為可能.該研究內容主要涉及轉化獲得轉基因甘藍,對已獲得的卡那霉素抗性植株的分子檢測,轉化植株的抗蟲鑒定,同時對外源基因在轉化植株自交后代的遺傳分離情況進行了研究.取得的

3、主要研究結果如下:1.10mg/L-15mg/L的卡那霉素(Kanamycin, Km)可以有效抑制"牛心"甘藍下胚軸綠芽的再生,使其不能分化出芽或分化出白色或紫色芽.2.頭孢霉素(Cefotaxime, Cef)對"牛心"甘藍下胚軸綠芽的誘導有較強的抑制作用.隨著頭孢霉素濃度的增加,抑制作用加劇.3.共培養(yǎng)時間影響結球甘藍轉化頻率,該實驗中共培養(yǎng)48h得到的抗性芽較多.4.轉化獲得"牛心"結球甘藍植株.經(jīng)PCR檢測,證明Bt基因已經(jīng)整

4、合到結球甘藍基因組中.5.提取部分T<,0>代"中甘八號"PCR陽性植株的基因組DNA,經(jīng)Southern雜交分析,證明Bt基因已經(jīng)整合到結球甘藍基因組中.6、"中甘八號"中經(jīng)Southern雜交檢測的陽性植株,在蕾期進行自交,收獲T<,1>代種子.對T<,1>世代植株進行苗期卡那霉素涂抹葉片和PCR擴增分析鑒定,發(fā)現(xiàn)Bt基因和NPTII基因在植株體內遺傳符合顯性單基因孟德爾遺傳規(guī)律.7.分別對"中甘八號"轉化的T<,0>、T<,1>代