甘藍(lán)型油菜轉(zhuǎn)基因抗病蟲植株獲得及后代鑒定.pdf

1、油菜是我國重要的油料作物之一，其種植面積和產(chǎn)量居世界前列。油菜在生長發(fā)育過程中常常受到病害、蟲害和雜草等生物逆境的脅迫，對油菜生產(chǎn)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。為了改善油菜的抗病蟲害的能力，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將一些抗病、蟲以及抗除草劑等基因轉(zhuǎn)入到甘藍(lán)型油菜品種（系）中，為創(chuàng)造油菜新的抗性資源帶來了新的機(jī)遇。本研究采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將Bt抗蟲基因Cry1C、Cry2A導(dǎo)入甘藍(lán)型油菜7-5，Westar中，再以分別轉(zhuǎn)入單價(jià)抗蟲基因Cry1C和Cry2A的單

2、株為親本進(jìn)行雜交使兩個(gè)基因聚合，以期得到雙價(jià)Bt抗蟲轉(zhuǎn)基因油菜;另外以甘藍(lán)型油菜7-5，Westar，P61-5，T45等材料為受體導(dǎo)入水稻的抗病基因Ospgip，以期獲得具有明顯抗（耐）菌核病的油菜轉(zhuǎn)基因株系。
　　 本研究主要內(nèi)容包括：⑴通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法分別獲得了油菜轉(zhuǎn)Ospgip基因植株169株、轉(zhuǎn)Cry1C植株57株和轉(zhuǎn)Cry2A植株39株，PCR檢測結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因植株的陽性率分別為90.4％、33.5％和48.8％。對

3、轉(zhuǎn)基因植株后代進(jìn)行RT-PCR、Real-time PCR的表達(dá)分析證實(shí)Ospgip基因、Cry1C基因和Cry2A基因分別在轉(zhuǎn)基因株系中穩(wěn)定表達(dá)。⑵42個(gè)轉(zhuǎn)Ospgip基因株系的苗期離體葉片接菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示33個(gè)轉(zhuǎn)基因株系菌斑的平均面積小于對照，占總株系數(shù)78.6％;37個(gè)轉(zhuǎn)Ospgip基因株系的成株期莖稈活體接菌結(jié)果顯示有33個(gè)株系菌斑平均面積小于對照，分別占植株總株系數(shù)的89.2％。相關(guān)性分析結(jié)果表明轉(zhuǎn)Ospgip基因株系的苗期與

4、成株期的抗性相關(guān)性不顯著(r＜0.2)。⑶對部分轉(zhuǎn)Ospgip基因株系苗期離體葉片接菌后的表達(dá)水平與菌斑面積的相關(guān)性分析結(jié)果顯示菌斑面積與Ospgip基因的表達(dá)量呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.72154)。⑷對7-5、P61-5及T45等3個(gè)不同受體材料的轉(zhuǎn)Ospgip基因株系數(shù)據(jù)分析表明:轉(zhuǎn)基因株系的抗病能力都得到明顯的提高。⑸轉(zhuǎn)Cry1C和Cry2A基因T0代植株及T1代株系的離體葉片室內(nèi)抗蟲檢測結(jié)果顯示，攜帶Cry1C基因的植株葉片對小

5、菜蛾幼蟲具有明顯的抗性，二齡小菜蛾在喂食Cry1C轉(zhuǎn)基因葉片后出現(xiàn)明顯的生長發(fā)育緩慢甚至死亡的情況;攜帶Cry2A基因的轉(zhuǎn)基因材料在T0代表現(xiàn)出一定的抗蟲性，小菜蛾出現(xiàn)部分生長緩慢的現(xiàn)象，但T1代株系抗蟲性效果不明顯，小菜蛾幼蟲生長正常。⑹聚合Cry1C和Cry2A的轉(zhuǎn)基因植株葉片的室內(nèi)抗蟲檢測結(jié)果表明聚合雙價(jià)基因植株的抗蟲效果顯著高于轉(zhuǎn)化單價(jià)Cry2A基因的植株，與轉(zhuǎn)化單價(jià)Cry1C基因的抗蟲效果差異不顯著。⑺對Cry1C和Cry2A