甘藍型油菜轉(zhuǎn)基因抗病蟲植株獲得及后代鑒定.pdf

1、油菜是我國重要的油料作物之一，其種植面積和產(chǎn)量居世界前列。油菜在生長發(fā)育過程中常常受到病害、蟲害和雜草等生物逆境的脅迫，對油菜生產(chǎn)造成很大的經(jīng)濟損失。為了改善油菜的抗病蟲害的能力，利用轉(zhuǎn)基因技術將一些抗病、蟲以及抗除草劑等基因轉(zhuǎn)入到甘藍型油菜品種（系）中，為創(chuàng)造油菜新的抗性資源帶來了新的機遇。本研究采用農(nóng)桿菌介導法將Bt抗蟲基因Cry1C、Cry2A導入甘藍型油菜7-5，Westar中，再以分別轉(zhuǎn)入單價抗蟲基因Cry1C和Cry2A的單

2、株為親本進行雜交使兩個基因聚合，以期得到雙價Bt抗蟲轉(zhuǎn)基因油菜;另外以甘藍型油菜7-5，Westar，P61-5，T45等材料為受體導入水稻的抗病基因Ospgip，以期獲得具有明顯抗（耐）菌核病的油菜轉(zhuǎn)基因株系。
　　 本研究主要內(nèi)容包括：⑴通過農(nóng)桿菌介導法分別獲得了油菜轉(zhuǎn)Ospgip基因植株169株、轉(zhuǎn)Cry1C植株57株和轉(zhuǎn)Cry2A植株39株，PCR檢測結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因植株的陽性率分別為90.4％、33.5％和48.8％。對

3、轉(zhuǎn)基因植株后代進行RT-PCR、Real-time PCR的表達分析證實Ospgip基因、Cry1C基因和Cry2A基因分別在轉(zhuǎn)基因株系中穩(wěn)定表達。⑵42個轉(zhuǎn)Ospgip基因株系的苗期離體葉片接菌實驗結(jié)果顯示33個轉(zhuǎn)基因株系菌斑的平均面積小于對照，占總株系數(shù)78.6％;37個轉(zhuǎn)Ospgip基因株系的成株期莖稈活體接菌結(jié)果顯示有33個株系菌斑平均面積小于對照，分別占植株總株系數(shù)的89.2％。相關性分析結(jié)果表明轉(zhuǎn)Ospgip基因株系的苗期與

4、成株期的抗性相關性不顯著(r＜0.2)。⑶對部分轉(zhuǎn)Ospgip基因株系苗期離體葉片接菌后的表達水平與菌斑面積的相關性分析結(jié)果顯示菌斑面積與Ospgip基因的表達量呈顯著負相關(r=-0.72154)。⑷對7-5、P61-5及T45等3個不同受體材料的轉(zhuǎn)Ospgip基因株系數(shù)據(jù)分析表明:轉(zhuǎn)基因株系的抗病能力都得到明顯的提高。⑸轉(zhuǎn)Cry1C和Cry2A基因T0代植株及T1代株系的離體葉片室內(nèi)抗蟲檢測結(jié)果顯示，攜帶Cry1C基因的植株葉片對小

5、菜蛾幼蟲具有明顯的抗性，二齡小菜蛾在喂食Cry1C轉(zhuǎn)基因葉片后出現(xiàn)明顯的生長發(fā)育緩慢甚至死亡的情況;攜帶Cry2A基因的轉(zhuǎn)基因材料在T0代表現(xiàn)出一定的抗蟲性，小菜蛾出現(xiàn)部分生長緩慢的現(xiàn)象，但T1代株系抗蟲性效果不明顯，小菜蛾幼蟲生長正常。⑹聚合Cry1C和Cry2A的轉(zhuǎn)基因植株葉片的室內(nèi)抗蟲檢測結(jié)果表明聚合雙價基因植株的抗蟲效果顯著高于轉(zhuǎn)化單價Cry2A基因的植株，與轉(zhuǎn)化單價Cry1C基因的抗蟲效果差異不顯著。⑺對Cry1C和Cry2A