Nogo-A及NgR在新生鼠缺氧缺血性腦損傷腦組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、第一部分：新生鼠缺氧缺血性腦損傷腦組織光鏡及電鏡改變目的：了解新生大鼠缺氧缺血腦損傷時(shí)，腦組織病理學(xué)及電鏡改變。 方法：7日齡SD大鼠經(jīng)右側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎，吸入8％O2、92％N2混合氣體行低氧處理3h，以建立缺氧缺血性腦損傷(HIBD)的動(dòng)物模型。用HE染色觀察腦組織病理變化，Nissl染色分析神經(jīng)元數(shù)量變化，電鏡檢查超微結(jié)構(gòu)改變。 結(jié)果：(1)缺氧缺血后6h-12h，右側(cè)腦組織腫脹，神經(jīng)元水腫；24h神經(jīng)元水腫加重，并

2、同時(shí)出現(xiàn)神經(jīng)元壞死；72h出現(xiàn)明顯的腦梗塞。(2)缺氧缺血后12h、24h及72h組神經(jīng)元數(shù)量遞減，均與對(duì)照組有顯著性差異(P均＜0.05)。(3)缺氧缺血后6h電鏡觀察腦組織線粒體形態(tài)有明顯改變。 結(jié)論：結(jié)扎新生SD大鼠右側(cè)頸總動(dòng)脈及吸入8％O2行低氧處理3h，經(jīng)光鏡檢查腦組織，證實(shí)符合HIBD的病理改變，即神經(jīng)元水腫及壞死，且神經(jīng)元數(shù)量遞減，同時(shí)超微結(jié)構(gòu)也發(fā)生改變。表明本研究HIBD動(dòng)物模型制作成功。第二部分：新生鼠缺氧缺

3、血性腦損傷腦組織Nogo-AmRNA和Nogo-A蛋白表達(dá)及意義目的：觀察Nogo-AmRNA及Nogo-A蛋白在缺氧缺血新生鼠腦組織中表達(dá)量的變化，探討其意義。 方法：采用經(jīng)右側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎加缺氧處理的7日齡SD大鼠HIBD模型，應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)HIBD新生鼠腦組織Nogo-AmRNA表達(dá)的變化；免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Nogo-A蛋白的分布及含量變化；WesternBlot檢測(cè)Nogo-A蛋白含量變化。統(tǒng)計(jì)方法采用成組t

4、檢驗(yàn)和單因素方差分析q檢驗(yàn)。 結(jié)果：(1)HIBD新生SD大鼠腦中Nogo-AmRNA與對(duì)照組相比，6小時(shí)開(kāi)始升高，12小時(shí)達(dá)到峰值，P均＜0.05，繼而開(kāi)始下降至與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P均＞0.05；(2)免疫組織化學(xué)方法觀察到Nogo-A蛋白在正常新生SD大鼠腦中分布廣泛，在大腦皮層及海馬均有較多Nogo-A分布；免疫組織化學(xué)方法和Western蛋白印跡方法同時(shí)表明HIBD新生SD大鼠腦中Nogo-A蛋白12h開(kāi)始升高，24

5、h達(dá)到高峰，P均＜0.05，隨即開(kāi)始下降至與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P均＞0.05；(3)HIBD各組Nogo-A蛋白與第一部分中Nissl染色所示神經(jīng)元密度變化的關(guān)系為，12-24h神經(jīng)元密度遞減，而Nogo-A蛋白表達(dá)遞增，到72h，神經(jīng)元密度進(jìn)一步減少，Nogo-A蛋白表達(dá)也開(kāi)始下降；(4)Nogo-AmRNA提前于Nogo-A蛋白發(fā)生表達(dá)變化，但兩者變化趨勢(shì)一致。 結(jié)論：(1)HIBD新生SD大鼠腦組織中Nogo-AmRNA

6、和Nogo-A蛋白均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)；(2)HIBD12-24hNogo-A蛋白含量2升高，從此時(shí)Nogo-A蛋白與神經(jīng)元密度變化呈反比的關(guān)系來(lái)看，它與抑制神經(jīng)元再生可能有一定關(guān)系，而72h出現(xiàn)的Nogo-A含量下降可能與此時(shí)神經(jīng)元密度進(jìn)一步降低，致神經(jīng)元上表達(dá)的Nogo-A蛋白隨之減少有關(guān)。第三部分：新生鼠缺氧缺血性腦損傷腦組織NgRmRNA和NgR蛋白表達(dá)及意義目的：觀察Ng-RmRNA及NgR蛋白在缺氧缺血新生鼠腦組織中表

7、達(dá)量的變化，探討其意義。 方法：采用經(jīng)右側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎加缺氧處理的7日齡SD大鼠HIBD模型，應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)HIBD新生鼠腦組織NgRmRNA表達(dá)的變化；免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)NgR蛋白的分布及含量變化；WesternBlot檢測(cè)NgR蛋白含量變化。統(tǒng)計(jì)方法采用成組t檢驗(yàn)和單因素方差分析q檢驗(yàn)。 結(jié)果：(1)HIBD新生SD大鼠腦中NgRmRNA與對(duì)照組相比，6小時(shí)開(kāi)始升高，12小時(shí)達(dá)到峰值，24小時(shí)有所下降但仍

8、持續(xù)在較高水平，P均＜0.05，隨即開(kāi)始降至與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P均＞0.05；(2)免疫組織化學(xué)方法觀察到NgR蛋白在正常新生SD大鼠腦中分布廣泛，大腦皮層及海馬均有較多NgR分布；(3)免疫組織化學(xué)方法和Western蛋白印跡方法同時(shí)表明HIBD新生SD大鼠腦中NgR蛋白6h開(kāi)始升高，24h達(dá)到高峰，72小時(shí)仍持續(xù)在較高水平，P均＜0.05，隨即開(kāi)始降至與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05。 結(jié)論：(1)HIBD新生SD大鼠