新生大鼠缺氧缺血性腦損傷導致腦膽固醇穩(wěn)態(tài)破壞的研究.pdf

1、目的：研究新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后腦膽固醇穩(wěn)態(tài)變化情況及其對腦白質發(fā)育的影響，并初步探討引起該變化的可能機制。 發(fā)生于圍產期的缺氧缺血性腦病 (Hypoxic-ischemic Encephalopathy，HIE)可造成新生兒神經系統(tǒng)發(fā)育障礙，導致患兒死亡，幸存者也多留有嚴重的后遺癥如腦性癱瘓、認知與學習障礙以及癲癇等，至今尚無有效的治療方法。因此，對該病的發(fā)病機制進行深入研究以尋求更加安全有效的治療方法意義重大。

2、膽固醇是一類多面性分子，是細胞膜及膜性細胞器的重要組成成分，在腦中含量豐富。近年來，膽固醇在腦發(fā)育中的作用越來越受到關注，軸突的生長、樹突的發(fā)生、神經元的存活、星形膠質細胞的增生、物質的跨膜轉運以及發(fā)育中的一些信號轉導過程都離不開膽固醇的參與。更重要的是，膽固醇是形成髓鞘不可或缺的物質，同時也是腦白質發(fā)育的限速物質，在腦尤其是發(fā)育期腦組織中，膽固醇穩(wěn)態(tài)的維持至關重要。 研究發(fā)現(xiàn)，大鼠生后前3周，腦膽固醇濃度迅速升高，這時正是髓鞘

3、形成的關鍵時期，而缺氧缺血性腦損傷也發(fā)生于此時，鑒于膽固醇在髓鞘發(fā)育中的重要作用，本實驗利用新生大鼠缺氧缺血性腦損傷模型，觀察損傷后腦膽固醇穩(wěn)態(tài)變化與腦自質發(fā)育情況。由于在一些重癥疾病中促炎性細胞因子的大量釋放可引起低膽固醇血癥，本實驗也檢測了損傷后腦TNF-α與 IL-6水平，以期為HIE的發(fā)病機制及治療方法的研究提供新的思路。 方法：選用7日齡Sprague-Dawley(SD)大鼠，隨機分為正常對照組、假手術組與模型組，將

4、大鼠左側頸總動脈結扎、剪斷，并缺氧(氧濃度8％)兩小時以建立新生大鼠缺氧缺血模型，測量生后8、9、10、14及21d動物腦重及體重增長情況；以高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)檢測上述時間點腦膽固醇濃度變化情況；在生后10d與14d以髓磷脂堿性蛋白(Myelin BasicProtein，MBP)的免疫組織化學染色評估腦白質發(fā)育情況；生后21 d以電鏡觀察外囊髓鞘的超

5、微結構；并在術后12h以酶聯(lián)免疫吸附實驗(Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA)檢測腦TNF-α與IL-6表達情況結果：生后21 d，模型組動物體重明顯低于正常對照組(P<0.001)，模型組動物腦重則在生后14d和21 d時明顯降低(P<0.001)；在損傷早期，即生后8d、9d及10d，腦膽固醇濃度顯著降低(P<0.05)：MBP免疫組織化學染色顯示：模型組的陽性染色明顯弱于正常對照組(P<

6、0.01)，以外囊、內囊、基底節(jié)及丘腦等處明顯；電鏡檢測可見模型組外囊處髓鞘數(shù)量減少、厚度降低，并有纏繞松散的現(xiàn)象出現(xiàn)；術后12h，模型組腦TNF-α與IL-6表達顯著增加(P<0.05)。 結論：一、新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后體重與腦重增長緩慢，且腦重增長的緩慢程度高于體重。二、新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后，腦膽固醇穩(wěn)態(tài)被破壞，在損傷早期，腦膽固醇濃度明顯降低。三、不同白質腦區(qū)髓鞘發(fā)育存在時間特異性。新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后，