BMP-9基因轉(zhuǎn)染羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究及其修復(fù)同種異體羊大段骨缺損的初步研究.pdf

1、目的：通過體外培養(yǎng)羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),并利用骨形態(tài)發(fā)生蛋白-9(BMP-9)基因轉(zhuǎn)染BMSCs,接種于可吸收明膠海綿在體外構(gòu)建組織工程骨；并將該組織工程骨復(fù)合物移植到羊脛骨大段骨缺損處,了解轉(zhuǎn)染及未轉(zhuǎn)染BMP-9的BMSCs的生物學(xué)特性,探討其在大動物體內(nèi)的成骨效果及其臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　 方法：體外全骨髓貼壁法培養(yǎng)羊BMSCs,應(yīng)用腺病毒介導(dǎo)BMP-9基因轉(zhuǎn)染BMSCs:倒置顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞形態(tài)變化；MT

2、T法測定轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞生長曲線；熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率；BMSCs堿性磷酸酶(ALP)活性半定量測定及Von Kossa's鈣結(jié)節(jié)染色觀察轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞功能變化；將轉(zhuǎn)染及未轉(zhuǎn)染BMP-9基因的羊BMSCs與可吸收明膠海綿共培養(yǎng)；短暫體外培養(yǎng)后手術(shù)將復(fù)合物分組移植到4只羊脛骨大段骨缺損處；于不同時間點(diǎn)(4周、12周)行X線攝片和組織切片行HE染色觀察骨基質(zhì)的生成情況。
　　 結(jié)果：腺病毒介導(dǎo)的BMP-9轉(zhuǎn)染羊BMSCs與未轉(zhuǎn)染的BMS

3、Cs形態(tài)稍不同；生長周期基本一致,接種后2～3天為生長遲滯期,3天后進(jìn)入對數(shù)生長期,6～7天為生長平臺期,其后生長速度減緩；細(xì)胞轉(zhuǎn)染率為80％；轉(zhuǎn)染組BMSCs的ALP活性較未轉(zhuǎn)染組明顯增高(p<0.05),Von Kossa’s鈣結(jié)節(jié)染色比較轉(zhuǎn)染細(xì)胞形成的鈣結(jié)節(jié)明顯大于未轉(zhuǎn)染組；熒光顯微鏡觀察見BMSCs在可吸收明膠海綿內(nèi)生長良好。4周X線攝片見骨缺損處轉(zhuǎn)染組有新生骨組織成像顯影,12周后顯影增大；未轉(zhuǎn)染組4周時未見明顯新生骨組織成像

4、顯影,12周時模糊顯影；HE染色見:未轉(zhuǎn)染組內(nèi)有部分新生骨形成,而轉(zhuǎn)染組形成的新生骨組織較多。
　　 結(jié)論：羊等大型動物BMSCs培養(yǎng)較小型動物更困難。采用貼壁法成功培養(yǎng)出羊BMSCs具有較強(qiáng)的遺傳穩(wěn)定性和增殖能力。BMP-9基因轉(zhuǎn)染羊BMSCs,可促進(jìn)BMSCs向成骨細(xì)胞增殖分化。轉(zhuǎn)染了BMP-9的BMSCs在可吸收明膠海綿上生長良好,成功構(gòu)建了BMP-9基因修飾的組織工程骨。BMP-9基因修飾的BMSCs可作為骨組織工程的種