bFGF、BMP-2基因轉染對羊骨髓間充質干細胞成骨功能影響的體外實驗研究.pdf

1、目的：分析bFGF和BMP-2基因單獨和聯(lián)合轉染對體外培養(yǎng)的羊BMSCs的增殖和骨向分化的影響，比較Collagen-Ⅰ、OC、OPN等成骨相關基因于轉染前后相對表達量的差別，為構建組織工程骨的種子細胞做理論依據(jù)。
　　方法：全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)羊BMSCs，構建bFGF、BMP-2慢病毒載體，分別轉染羊BMSCs，流式細胞儀檢測轉染率，將得到bFGF組、BMP-2組、聯(lián)合組，對照組細胞，提取RNA后使用實時定量PCR和Western

2、-blot檢測Collagen-Ⅰ、OC、OPN等成骨相關基因的mRNA水平和蛋白水平相對表達量的變化。
　　結果：（1）慢病毒載體轉染的BMSCs的轉染率達95.4％，且 bFGF和BMP-2均穩(wěn)定表達。（2）mRNA水平上，在 Collagen-Ⅰ和OC基因，bFGF主效應、BMP-2主效應、交互效應均有統(tǒng)計學意義（P﹤0.05）。bFGF和BMP-2均能促進BMSCs的兩基因高表達，且bFGF與BMP-2間存在協(xié)同作用。聯(lián)合

3、基因轉染時Collagen-Ⅰ和OC基因表達高于單一基因轉染。但在OPN基因，bFGF主效應無統(tǒng)計學意義（P﹥0.05）。多元析因顯示，bFGF和BMP-2兩因子均能增高成骨相關基因 mRNA表達且存在協(xié)同的交互作用（P﹤0.05）。（3）蛋白水平上，在Collagen-Ⅰ、OC和OPN蛋白，bFGF主效應、BMP-2主效應、交互效應均有統(tǒng)計學意義（P﹤0.05）。bFGF和BMP-2均能促進BMSCs的三個成骨相關基因蛋白高表達，且b

4、FGF與BMP-2間分別存在協(xié)同作用。聯(lián)合基因轉染時Collagen-Ⅰ和OC蛋白表達高于單一基因轉染。多元析因顯示，bFGF和BMP-2兩因子均能增高成骨相關蛋白表達且存在協(xié)同的交互作用（P﹤0.05）。
　　結論：體外實驗顯示bFGF和BMP-2在成骨相關基因的表達上具有協(xié)同的交互作用，且聯(lián)合轉染組中的Collagen-Ⅰ、OC、OPN等成骨相關基因mRNA水平和蛋白水平相對表達量均最高，該組細胞的成骨功能最強，適合作為組織工