復(fù)方三角風(fēng)注射液的研制.pdf

1、乳房炎是奶牛的一種常見(jiàn)多發(fā)病，是奶牛業(yè)生產(chǎn)中花費(fèi)最多的疾病之一。乳房炎的治療主要采用抗生素和中草藥治療，由于抗生素的殘留及耐藥性問(wèn)題，中草藥治療乳腺炎已成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。該研究根據(jù)奶牛乳房炎致病菌的特點(diǎn)，選用三角風(fēng)、紫菀、威靈仙等5味藥進(jìn)行單方有效成分和體外抑菌探索，開發(fā)出純中藥制劑復(fù)方三角風(fēng)注射液，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下： 1.本文首次報(bào)道了三角風(fēng)的化學(xué)成分 本試驗(yàn)根據(jù)試管預(yù)試法和圓形濾紙層析法的特征性顯色反應(yīng)、沉淀

2、反應(yīng)和色譜結(jié)果分析.結(jié)果表明：三角風(fēng)化學(xué)成分主要有皂苷、有機(jī)酸、生物堿、鞣質(zhì)、酚性成分、糖類等。 2.本文首次報(bào)道了三角風(fēng)有效成分和生物堿的提取與體外抑菌結(jié)果 該試驗(yàn)采用經(jīng)典的醇類溶劑提取法。從300g三角風(fēng)生藥中提取出總生物堿0.8453g，得率為0.28％。抑菌結(jié)果表明：三角風(fēng)乙醇浸膏水溶液和三角風(fēng)生物堿對(duì)5種獸醫(yī)臨床常見(jiàn)病原微生物均有較強(qiáng)的抑菌作用。特別是總生物堿對(duì)金色葡萄球菌、鏈球菌最敏感。 3.對(duì)三角風(fēng)

3、的有效成分采用系統(tǒng)溶劑法進(jìn)行了分級(jí)分離研究，并對(duì)分離出來(lái)韻每一級(jí)化合物進(jìn)行了體外抑菌試驗(yàn)和得率測(cè)定 用系統(tǒng)溶劑法對(duì)三角風(fēng)乙醇提取物的水溶液進(jìn)行萃取分離，萃取物的得率為：正丁醇萃取部分得率最高(2.04％)>剩余水溶液部分(1.20％)>乙酸乙酯萃取部分(0.20％)>氯仿萃取部分(0.13％)>石油醚萃取部分(0.04％)；萃取物的抑菌結(jié)果：除剩余水溶液部分無(wú)抑菌作用外，其余4部分都一定的抑菌效果，正丁醇萃取部分抑菌效果最好，特

4、別對(duì)巴氏桿菌和鏈球菌最為敏感。 4.建立了分離和鑒定三角風(fēng)皂苷類化合物的TLC、HPLC試驗(yàn)條件方法 根據(jù)有皂苷的物理化學(xué)性質(zhì)和有機(jī)物的極性特點(diǎn)，利用展開劑的常規(guī)方法與Glajch三角形法相結(jié)合，篩選出分離總皂苷的薄層層析展開劑體系。篩選結(jié)果為：甲醇∶正丁醇∶氯仿(16∶16∶67，V/V)，其Rf值分別為0.30、0.38、051、0.62。 對(duì)HPLC洗脫劑、洗脫流速、洗脫柱溫度、進(jìn)樣量、波長(zhǎng)等條件進(jìn)行逐步篩

5、選，篩選結(jié)果為：HPLC條件：流動(dòng)相：乙腈—水，柱溫30℃，流動(dòng)相流速為1.0ml/min，進(jìn)樣量：10ul，波長(zhǎng)：214nm. 5.對(duì)紫菀進(jìn)行了化學(xué)成分鑒定、有效成分提取及體外抑菌研究 本試驗(yàn)根據(jù)試管預(yù)試法和圓形濾紙層析法特征性顯色反應(yīng)、沉淀反應(yīng)和色譜結(jié)果表明：紫菀化學(xué)成分主要含有生物堿、有機(jī)酸、黃酮類、多糖、酚類、鞣質(zhì)、黃酮類、植物三萜和揮發(fā)油等。與有關(guān)紫菀化學(xué)成分分析文獻(xiàn)報(bào)道比較，與本試驗(yàn)的研究結(jié)果基本相似，但我們

6、的結(jié)果還檢驗(yàn)出了多糖和生物堿，且生物堿的含量達(dá)0.1523％；說(shuō)明紫菀的化學(xué)成分存在地方差異，其生物堿的有無(wú)及含量高低受生長(zhǎng)環(huán)境、季節(jié)等多因素的影響。 本文首次用紫菀乙醇提取液和生物堿對(duì)獸醫(yī)臨床常見(jiàn)的病原微生物進(jìn)行了抑菌研究，結(jié)果表明：紫菀對(duì)沙門氏菌、巴氏桿菌、鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌都具有較好的抑菌和殺菌作用。 6.復(fù)方三角風(fēng)注射液生產(chǎn)工藝研究 根據(jù)酸水提取法、超聲提取法、水提取法的體外抑菌效果和制劑的

7、穩(wěn)定性進(jìn)行篩選出酸水提取乙醇沉淀法為復(fù)方三角風(fēng)注射液生產(chǎn)工藝，用酸水提取乙醇沉淀制備的復(fù)方三角風(fēng)注射液為棕紅色澄清透明液體，PH值為6.0±0.3，每1ml注射劑相當(dāng)于生藥2g，規(guī)格10ml/支、5ml/支。 7.復(fù)方三角風(fēng)注射液安全性評(píng)價(jià) 對(duì)復(fù)方三角風(fēng)注射液制劑的穩(wěn)定性、熱原、溶血性、過(guò)敏源、刺激性進(jìn)行檢驗(yàn)以及急性毒性試驗(yàn)評(píng)價(jià)都符合《中華人民共和國(guó)獸藥典》(2005年版)注射液的規(guī)定，適合肌肉注射給藥。 8.復(fù)

8、方三角風(fēng)注射液的臨床療效研究 為了便于確定臨床的使用劑量和使用方法，對(duì)不同時(shí)間、不同地點(diǎn)患乳腺炎120頭奶牛進(jìn)行隨機(jī)分為4組：高劑量(0.1ml/kg.bw)、中劑量組(0.05ml/kg.bw)、低劑量組(0.025ml/kg.bw)和對(duì)照組(注射10ml/頭的生理鹽水)，給藥組治療有效率結(jié)果為96.6％、86.6％，53.3％。根據(jù)臨床治療結(jié)果、給藥劑量綜合考慮，0.05ml.kg.bw適合用于作復(fù)方三角風(fēng)注射液的臨床治療使