MMP-9和IL-8在缺血再灌注過程中的變化和臨床意義及其相關(guān)性研究.pdf

1、目的：隨著人類生活水平的不斷提高及人口的老齡化，冠心病尤其是急性心肌梗死(AMI)的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)。在外科方面，AMI早期治療方法為急診冠脈搭橋術(shù)，急診冠脈搭橋后必然伴隨著缺血再灌注損傷。基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)在缺血再灌注過程中的作用是近年來醫(yī)學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)。MMP-9是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)家族中分子量最大的酶(92KD)，又稱明膠酶B，可降解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)。白介素-8(IL-8)是由諸多細(xì)胞產(chǎn)生具有趨化作

2、用的早期炎癥細(xì)胞因子，6～10KD蛋白質(zhì)，IL-8對(duì)中性粒細(xì)胞具有趨化作用，引導(dǎo)中性粒細(xì)胞變性及顆粒的釋放，是中性粒細(xì)胞激活和遷移的重要調(diào)節(jié)因子和進(jìn)入損傷組織的重要介質(zhì)，它是在損傷病理過程中起著重要作用的細(xì)胞因子。IL-8能誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞至心肌細(xì)胞的浸潤、激活，促進(jìn)缺血再灌注損傷的發(fā)生。MMP-9和IL-8可能參與心肌梗死后許多病理生理過程。本實(shí)驗(yàn)研究大白兔AMI再灌注后MMP-9及IL-8在血漿水平的變化，研究其時(shí)間過程，并分析MMP

3、-9及IL-8與AMI嚴(yán)重性的關(guān)系，探討其在AMI中可能的病理生理機(jī)制、臨床意義及相關(guān)性。 方法：新西蘭大耳白兔57只，兔齡為3～4個(gè)月，體重2500～3000g，隨機(jī)分為偽手術(shù)組(n=7)，心肌梗死組(n=15)及缺血再灌注組(n=35)。缺血再灌注組又隨機(jī)分為2h組(n=10)、4h組(n=12)和6h組(n=13)。所有大白兔術(shù)前用10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射進(jìn)行麻醉，麻醉好后行胸骨左緣第2、3、4肋間開胸，開胸后給

4、予肝素鈉1mg/kg，以防止阻斷后冠脈內(nèi)形成血栓。制作模型過程中行心電圖監(jiān)測(cè)，偽手術(shù)組心電圖無變化，心肌梗死組及缺血再灌注組Ⅱ、Ⅲ、AVF導(dǎo)聯(lián)出現(xiàn)ST段的抬高。偽手術(shù)組只行冠狀動(dòng)脈后降支置線，偽結(jié)扎；心肌梗死組行冠狀動(dòng)脈后降支永久結(jié)扎；缺血再灌注組分別阻斷冠狀動(dòng)脈后降支2h、4h和6h后放開，制作缺血再灌注模型。術(shù)后給予抗生素預(yù)防感染。各組均結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后降支中段。隨機(jī)取五只大白兔術(shù)前抽血測(cè)定MMP-9、IL-8及CM-MB值作為正常值

5、，所有組均在12h、1d、2d、3d、5d、7d經(jīng)大白兔頸靜脈抽取血液2ml，肝素抗凝后，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，提取上清液，存放于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩ｋp抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定血漿中MMP-9及IL-8的含量，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)CK-MB的含量。將ABS樹脂和丙酮以1:20的比例配制成灌注液，大白兔處死后用注射器經(jīng)右側(cè)冠狀動(dòng)脈口注入灌注液行冠狀動(dòng)脈塑形，然后將兔心臟放于37％的鹽酸中溶解，觀測(cè)血管再通情況。運(yùn)用

6、SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析及相關(guān)分析，采用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行各組間的兩兩比較，pearson檢驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)分析，以P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：(1)大白兔存活情況：偽手術(shù)組死亡0只，心肌梗死組死亡5只，死亡率為33.33％，缺血再灌注2h組、4h組和6h組分別死亡0只、2只、4只，死亡率分別為0、16.67％和30.77％。各組存活大白兔作為研究對(duì)象。(2)MMP-9變化情況：心肌梗死組及缺血再灌注組M

7、MP-9均從12h時(shí)逐漸升高，第3天達(dá)高峰，以后逐漸下降，第7天時(shí)仍高于正常值。缺血時(shí)間越長(即從缺血再灌注2h組、4h組、6h組、心肌梗死組)，MMP-9水平越高。各時(shí)間點(diǎn)(12h、1d、2d、3d、5d、7d)心肌梗死組及缺血再灌注組MMP-9明顯高于偽手術(shù)組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；心肌梗死組明顯高于缺血再灌注組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；缺血再灌注6h組明顯高于缺血再灌注4h及2h組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)

8、；缺血再灌注4h組明顯高于缺血再灌注2h組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。偽手術(shù)組MMP-9與正常值比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(3)IL-8變化情況：心肌梗死組及缺血再灌注組IL-8從12h時(shí)已開始升高，第2天達(dá)高峰，以后逐漸下降，第5天時(shí)已恢復(fù)正常。缺血時(shí)間越長(即從缺血再灌注2h組、4h組、6h組、心肌梗死組)，IL-8水平越高。在12h、1d、2d、3d時(shí)，心肌梗死組及缺血再灌注組IL-8明顯高于偽手術(shù)組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

9、(P＜0.05)：心肌梗死組明顯高于缺血再灌注組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；缺血再灌注6h組明顯高于缺血再灌注4h及2h組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；缺血再灌注4h組明顯高于缺血再灌注2h組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。偽手術(shù)組IL-8正常值比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(4)MMP-9及IL-8相關(guān)性：缺血再灌注組從12h到第3天，MMP-9與IL-8呈正相關(guān)，第5、7天時(shí)兩者無相關(guān)性。 結(jié)論： (1)血漿

10、MMP-9及IL-8與AMI缺血時(shí)間相關(guān)，缺血時(shí)間越長，血漿MMP-9及IL-8水平越高。說明血漿MMP-9及IL-8水平可預(yù)測(cè)急性心肌梗死的嚴(yán)重性，兩者血漿水平越高，AMI病情越嚴(yán)重。(2)血管再通越早，MMP-9及IL-8降低越明顯，死亡率越低?？梢酝茰y(cè)急性心肌梗死后血管再通的獲益可能與降低血漿MMP-9及IL-8水平有關(guān)。(3)在3天內(nèi)缺血再灌注組血管再通后血漿MMP-9與IL-8顯著正相關(guān)，血漿IL-8在缺血再灌注過程中可進(jìn)一步