糖尿病大鼠缺血再灌注腦組織血管他丁蛋白表達及其與MMP-9、VEGF的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：建立糖尿病大鼠腦缺血再灌注動物模型；觀察缺血腦組織血管他丁、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的蛋白表達及基質(zhì)金屬蛋白酶—9（MMP—9）的活性特點；研究缺血腦組織血管他丁表達與MMP—9活性的相關(guān)性；探討它們在糖尿病腦缺血再灌注腦組織損傷中的可能的機制。 方法： （1）隨機將健康Wistar大鼠分為假手術(shù)Ⅰ組3只，單純腦梗死組（CI組）17只；健康GK大鼠分為糖尿病假手術(shù)Ⅱ組3只，糖尿病腦梗死組（DM+CI組）17只。

2、將CI組及DM+CI組制作大腦中動脈阻塞（MCAO）模型，1.5h后實行再灌注，按隨機化原則各分為缺血再灌注3h、24h、72h、168h4個亞組，每個亞組3—5只。 （2）采用Longa5分制評分標(biāo)準(zhǔn)對各組腦缺血再灌注后大鼠進行神經(jīng)功能評分。 （3）western blot法檢測不同時間點血管他丁、VEGF的表達；明膠酶譜法檢測MMP—9的活性；用AlphaEaseFC分析目的條帶的灰度值。 （4）各項計數(shù)指標(biāo)

3、應(yīng)用spss13.0統(tǒng)計軟件進行方差分析、q檢驗和直線相關(guān)分析。 結(jié)果： （1）大鼠神經(jīng)功能評定結(jié)果：入選DM+CI組和CI組的大鼠清醒后均出現(xiàn)明顯的右側(cè)眼球下陷、眼裂變小等Homer征表現(xiàn)；并出現(xiàn)左側(cè)前肢屈曲，向左側(cè)轉(zhuǎn)圈或向左側(cè)傾倒，神經(jīng)功能評分1～3分。假手術(shù)組大鼠也出現(xiàn)明顯Homer征表現(xiàn)，但無其他神經(jīng)功能缺損體征。 （2）鼠腦組織中血管他丁蛋白的表達：假手術(shù)組鼠腦中可見少量的血管他丁的表達。隨著缺血再灌注

4、時間延長，DM+CI組和CI組血管他丁表達均增高，且兩組血管他丁表達呈現(xiàn)相似的變化規(guī)律：再灌注3h開始升高，至24h達到高峰，隨后逐漸降低，168h時仍高于正常水平；與相同再灌注時間點CI組相比，在24h和168h時間點DM+CI組血管他丁蛋白表達顯著增高（p<0.05）。 （3）鼠腦組織中VEGF蛋白的表達：假手術(shù)組鼠腦中存在微量的VEGF的表達，隨著缺血時間再灌注時間的推移，DM+CI及CI組VEGF的表達均增高，24h達高

5、峰，168h時仍高于正常水平；與相同再灌注時間點相比，DM+CI組VEGF蛋白表達明顯降低（p<0.05或0.01）。 （4）鼠腦組織中MMP—9的活性的表達：與假手術(shù)組腦組織相對比，缺血再灌注后不同時間點，DM+CI組和CI組MMP—9活性均明顯增高（p<0.01）：再灌注3h開始升高，至24h達到高峰，隨后逐漸降低，168h時仍顯著高于正常水平；與相同再灌注時間點CI組相比，在24h、72h和168h時間點DM+CI組MMP

6、—9活性顯著增高（p<0.05）。 （5）各組不同再灌注時間點缺血區(qū)血管他丁的蛋白表達和MMP—9活性的相關(guān)性分析：隨缺血再灌注時間延長，CI組及DM+CI組血管他丁的表達與MMP—9的活性均呈上升態(tài)勢，缺血再灌注后24 h二者均達高峰。經(jīng)直線相關(guān)分析，DM+CI組和CI組血管他丁的表達與MMP—9的活性之間均為正相關(guān)關(guān)系（F0.8833，p<0.05； F0.8894，p<0.05）。 結(jié)論： （1）缺血再灌注

7、后缺血腦組織血管他丁、VEGF蛋白表達及MMP—9的活性均增強，提示血管他丁、VEGF及MMP—9在腦缺血后組織病理生理變化的過程中發(fā)揮作用； （2）與單純腦梗死相比，糖尿病者腦缺血再灌注后VEGF蛋白表達明顯降低，而血管他丁的表達及MMP—9活性明顯增加，提示糖代謝異常對缺血再灌注后腦組織血管他丁、VEGF及MMP—9的表達均有顯著影響； （3）單純及糖尿病大鼠腦缺血再灌注后MMP—9活性與血管他丁表達存在直線正相關(guān)關(guān)